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本书简明扼要地介绍了分子遗传学的基本知识，基因工程的最新成就与前景，基因工程的基本过程，基因工程载体，酶切与连接，重组体ONA的导人与重组体转化子的鉴定，目的基因的表达与检测，克隆DNA的定向诱变，基因打靶技术，反义技术等内容。书后附有详细名词索引，因而又可把本书作名词解释来使用。
本书可作为有关专业的研究生及本科学生的选修课教材，并可供生物、农业、医学等方面有关的科研与教学的参考。
目录
- 第一章绪论
一、基因工程的概念
二、基因工程发展史
三、基因工程的巨大意义
四、生物技术与基因工程
五、我国的基因工程
六、基因工程的安全性问题
七、我国的《基因工程安全管理办法》
第二章基因工程的流程
一、基因工程一基本步骤
二、基因工程的上游工程——基因克隆
三、基因工程的流程
四、基因工程下游工程的分化
五、原核细胞表达系统
六、植物基因工程
七、昆虫或动物细胞表达系统
九、基因治疗
第三章DNA的分子特性与利用
一、脱氧核糖核酸
二、DNA变性
三、复性与杂交
四、DNA的复制
五、DNA的修复
六、生物的基因重组
七、基因
八、基因表达及其调控
九、启动子和增强子
十、DNA的分离和提取
十一、基因突变
十一、转座子及其在基因工程中的应用
第四章各种工具酶
一、工具酶与基因工程
二、限制酶
三、DNA聚合酶
四、DNA连接酶
五、S1核酸酶
六、Bal31核酸酶
七、碱性磷酸酶
八、逆转录酶
第五章目的基因的制取
一、目的基因
二、鸟松法
三、物理化学法
1?物理化学法分离基因的基本原理
2?物理化学法分离基因的主要方法
四、化学合成基因
五、酶促逆转录合成法
六、聚合酶链式反应
七、基因文库的概念
八、基因文库的大小
九、基因组文库
十、cDNA文库
第六章基因载体的选择与构建
一、基因克隆与基因重组
二、基因载体
三、载体的报告基因(标记基因)
四、细菌质粒载体
1?质粒的概念
2?质粒DNA的分子特性
3?质粒的复制和遗传
4?质粒的报告基因
5?质粒的转座子
6?质粒的改造
7?质粒载体的条件
8?质粒载体的多克隆位点
9?辨色鉴别重组克隆的质粒载体
10?常用的质粒载体
11?质粒DNA的提取
五、噬菌体和噬菌体载体的特点
2?λ噬菌体
3?溶菌性反应与溶源性反应
4?λ噬菌体的包装
5?野生型λ噬菌体的改造
6?单链噬菌体载体
7?粘性质粒载体
六、动物病毒载体
1?动物病毒载体的特点
2?杆状病毒载体
3?SV40载体
4?痘苗病毒载体
5?逆转录病毒载体
6?其他动物病毒载体
七、酵母质粒载体
1?酵母质粒载体的特点
2?整合载体
3?自我复制载体
4?酿酒酵母载体系统
第七章基因与载体连接(重组与克隆)
一、基因重组的概念
二、亚克隆
三、基因重组对载体的要求
四、连接前的处理
五、粘性末端连接
六、平端连接
七、人工接头连接
八、同聚物加尾连接
九、人生长激素基因的克隆
第八章重组DNA导入受体细胞
一、克隆与导入方法
二、受体细胞
三、大肠杆菌宿主菌
四、受体细菌的感受态
五、转化反应
六、磷酸钙沉淀法
七、体外馐转染法
八、共转化
九、电转化
十、微弹技术
十一、微注射技术
十二、脂质体导入法
十三、转化酵母菌
第九章重组体的筛选
一、转化子与筛选的概念
二、筛选方法的类型
1?快速细胞破碎法
2?煮沸法
3?基因定位法
4?DNA序列测定
5?依赖具有筛选性的载体
6?mRNA翻译检测
7?核酸探针与菌落原位杂交
8?Southern印迹杂交试验
9?免疫化学方法
10?酶免疫检测分析
第十章目的基因的表达
一、基因工程的目的
二、制约目的基因表达的因素
三、阅读框架
四、启动子与转录的影响
五、翻译过程对表达的影响
六、表达体系与表达产物的形式
七、大肠杆菌表达体系
八、人生长素基因在大肠杆菌中表达
九、构建分泌型表达载体
十、真核细胞表达体系的特点
十一、酵母表达体系
十二、昆虫或昆虫细胞表达体系
十三、哺乳动物细胞表达体系
十四、新型的胞浆表达体系
十五、表达检测系统
第十一章克隆的策略
一、克隆方法的分类
二、用质粒载体进行克隆
三、用λ噬菌体进行克降
四、用粘粒载体进行克隆
五、Northern杂交法
六、cDNA文库筛选法克隆
七、杂交筛选法
八、磁珠捕捉法
九、产物导向法
十、岛屿获救PCR法
十一、NotI连锁片段筛选法
十二、外显子捕捉法与外显子扩增法
十三、动物园杂交法(zooblot)
十四、剪接位点筛选法
十五、作图克隆法
十六、利用杂种细胞克隆法
十七、消减杂交法
十八、相同序列克隆法
十九、差异显示法
二十、显微切割与微克隆法
二十一、互补克隆法
二十二、插入诱变法
二十三、其他克隆方法
第十二章克隆DNA的定向诱变
一、基因突变与人工诱变技术
二、缺失突变和插入突变
三、碱基置换
四、寡核苷酸的定向诱变
五、定向诱变与蛋白质工程
第十三章基因打靶、遗传标记与检测
一、基因打靶技术
二、限制性片段长度多态性
三、随机扩增多态DNA技术
四、单链DNA构象多态性技术
五、扩增阻滞突变系统
六、表面呈现技术
七、原位DNA合成技术
八、连接酶链反应
九、双标记寡核苷酸捕获分析法
第十四章反义技术与ribozyme的应用
一、反义寡核苷酸
二、反义技术的原理
三、ASON的改造与反义药物
四、核酶(ribozyme)
1?ribozyme的克隆和应用价值
2?用于兽医和畜禽抗病育种
3?用于植物基因工程
4?用于基因治疗
主要参考文献
索引
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