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该手册由美国冷泉港实验室从事PCR研究的专家们共同研讨和撰稿,是一部最新、最权威的PCR技术大型实验手册,其内容从最简单的PCR操作到最新技术改进,从最基本的PCR技术到各种奇思妙想的PCR应用技巧无所不包,令读者目不暇接、备受启迪。具体内容包括PCR导论、样品的制备、引物设计、PCR产物检测(定量和分析)、RNA样品的PCR、PCR介导的克隆、PCR测序、PCR产物的克隆、PCR法制备突变体、其他扩增技术等。每个操作都配有疑难解析和完整的参考文献。
本书是《分子克隆实验指南》的姊妹篇,可供从事分子生物学、遗传学、细胞生物学、生物化学以及医学各领域研究的科研与教学人员参考,既是实验室必备的工具书,也是研究人员开阔眼界、拓展思路的不可不读之经典。
目录
- 译者序
前言
英文缩写与译名
第一章 PCR导论
第一节 PCR实验室的建立
第二节 标准PCR方法:β-珠蛋白DNA的快速分离和PCR分析
第三节 PCR中遗留污染的酶法控制
第四节 表面紫外线照射减少PCR污染
第五节 PCR反应的特异性、效率和忠实性
第六节 PCR的优化和疑难解析
第七节 长距离PCR
第二章 样品的制备
第一节 用基因释放剂快速制备PCR扩增用的DNA
第二节 石蜡包埋组织的PCR扩增:样品制备与固定的效果
第三节 RNA纯化
第三章 引物设计
第一节 PCR引物设计的一般概念
第二节 错配和简并引物的设计和应用
第三节 多重PCR
第四章 PCR产物检测:定量和分析
第一节 PCR产物的免疫检测
第二节 使用AmpliSensor分析的定量PCR
第三节 用任意引物PCR进行DNA指纹分析
第四节 用任意引物PCR进行RNA指纹分析
第五节 原位PCR
第六节 单链构象的多态性
第七节 用异源双链体迁移率测定技术对人免疫缺陷病毒进行遗传亚型分类
第八节 灵敏快速的突变检测方法——固相化学裂解法
第五章 RNA样品的PCR
第一节 PCR法测定基因表达的相对差异
第二节 运用磷光剂驻存技术的定量液相杂交PCR
第三节 用SNuPE法定量分析单个核苷酸差异的等位基因特异性序列
第四节 内部外显子和3’末端外显子的捕捉
第五节 表达PCR
第六章 PCR介导的克隆
第一节 cDNA末端的快速扩增
第二节 Panhandle PCR
第三节 差异显示法检测和鉴定表达基因
第四节 用磁珠和PCR构建减法cDNA文库
第五节 PCR法筛选DNA文库
第六节 YAC文库的自动化筛选
第七节 PCR无限增殖法得到重排免疫球蛋白基因表达文库
第七章 PCR测序
第一节 PCR扩增DNA产物的直接测序
第二节 循环测序法
第八章 PCR产物的克隆
第一节 PCR产物的克隆策略
第二节 PCR产物的DNA片段的克隆和分析
第九章 PCR法制备突变体
第一节 致突变PCR
第二节 PCR突变和体内重组
第三节 PCR法构建突变基因及新型重组基因
第四节 快速PCR定点突变
第十章 其他扩增技术
第一节 连接酶链式反应(LCR)
第二节 3SR检测法的优化及特点
第三节 单管定量NASBA检测HIV-1 RNA
附录
用于引物选择的计算机软件
PCR中使用的修饰寡核苷酸
供应商
商标
索引