作为“实验室解决方案”系列丛书中的一本,本书更新了选自《酶学方法》的63、64、87、249、308和354各章内容。酶作用的动力学研究不仅能为酶反应过程提供必要信息,而且是洞察酶催化作用和调节作用机理的强有力工具。本书描述的方法在下述情况下特别有用:
1.考察新发现酶的催化行为;
2.考察定向进化酶突变体的动力学行为;
3.设计并优化新奇的治疗用药物。
作为忙碌的研究人员的必需工具,本书将帮助读者设计、执行和分析酶的动力学实验,既能为初学者,也能为专业科学家提供最好的实验方法和应用这些技术的忠告,以及适合其实验室的具体方法。
样章试读
目录
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前言
第一部分 起始速度 理论和方法
第一章 初始速度和同位素交换速度方程的导出 Charles Y.Huang
第一节 起始速度方程的导出
第二节 同位素交换速度方程的导出
第三节 结语
附录
参考文献
第二章 设计酶初始速度分析中的实际问题 R.Donnald Allison and Daniel L.Purich
第一节 绪论与更新
第二节 一般实验设计
第三节 初始速度的条件
第四节 酶的纯度和稳定性
第五节 底物纯度
第六节 底物浓度的范围
第七节 分析方法
第八节 测定反应平衡常数
第九节 选择缓冲剂
第十节 温度控制
第十一节 报告初始速度数据
第十二节 结语
参考文献
第三章 偶联酶分析中的技术 F.B.Rudolph,B.W.Baugher,and R.S.Beissner
第一节 理论
第二节 实际方面
第三节 预防措施
第四节 摘要
第五节 结语
参考文献
第四章 设计、分析竞争型动力学模型识别实验中的回归分析,实验误差和统计标准 Bengt Mannervik
第一节 基本概念
第二节 识别竞争型数学模型(速度方程)
第三节 实验设计
第四节 实验误差
第五节 设计和分析动力学实验指南
参考文献
第五章 酶反应进程曲线的非线性回归分析 R.G.Duggleby
第一节 导言
第二节 简单米氏酶
第三节 抑制剂的影响
第四节 复杂反应
第五节 导出完整速度方程的一般方法
第六节 实际考虑
第七节 不稳定酶
第八节 结论
附录A:回归分析
参考文献
第六章 pH对酶的影响 K.F.Tipton,A.G.McDonald,and H.B.F.Dixon
第一节 理论
第二节 本方法的局限性
第三节 实际方面
第四节 pH研究的实例
第五节 前景
参考文献
第七章 酶动力学中的温度效应 K.J.Laidler and B.F.Peterman
第一节 速度常数的分离
第二节 单底物反应的活化能和活化熵
第三节 多于一个底物的反应
第四节 酶系统中的扩散效应
第五节 酶失活
参考文献
第八章 定向突变:研究酶催化作用的工具 B.V.Plapp
第一节 更新
第二节 引言
第三节 目的
第四节 注意事项
第五节 策略
第六节 例证
第七节 结语
参考文献
第九章 酶作用的协同性:平衡和动力学方面 K.E.Neet
第一节 新进展
第二节 引言
第三节 图形表示和协同性程度的评价
第四节 曲线拟合法测定参数
第五节 酶作用协同性机理
第六节 模型的实验解释
第七节 热力学分析协同性、连接和多配体结合
第八节 配体结合部位和分子内信息传递
第九节 其他大分子系统中的协同性
第十节 未来方向
参考文献
第二部分 酶抑制剂作为研究酶催化作用的探针
第十章 可逆酶抑制剂作为研究酶作用机理的探针 H.J.Fromm
第一节 引言
第二节 理论
第三节 实际考虑
第四节 举例
第五节 局限性
第六节 结语
参考文献
第十一章 应用亲和标记研究酶结构和功能 B.V.Plapp
第一节 新进展
第二节 引言
第三节 亲和标记的使用
第四节 设计指向活性部位试剂的一些考虑
第五节 指向活性部位试剂的评价
第六节 指向活性部位试剂产生的反应加速
第七节 结语
参考文献
第十二章 基于机理的酶失活剂 R.B.Silverman
第一节 术语
第二节 酶失活剂的基础动力学
第三节 基于机理的酶失活剂的使用
第四节 基于机理的酶失活剂的标准
第五节 实验方案
第六节 应用
第七节 结论
参考文献
第三部分 检测酶反应中间物
第十三章 瞬变动力学法研究酶作用机理 C.A.Fierke and G.G.Hammes
第一节 引言
第二节 瞬变动力学理论
第三节 瞬变动力学的计算机模拟
第四节 快速混合法
第五节 弛豫法
第六节 二氢叶酸还原酶
第七节 核糖核酸酶P
第八节 脂肪酸合成酶
第九节 结论
参考文献
第十四章 聚合酶、三磷酸腺苷酶和酶中间物的快速淬灭动力学分析 K.A.Johnson
第一节 新进展
第二节 引言
第三节 瞬变态动力学分析原理
第四节 化学淬灭流动法
第五节 DNA聚合作用的动力学
第六节 三磷酸腺苷酶作用机理
第七节 检测酶中间物
第八节 数据分析
参考文献
第十五章 用电喷雾质谱在线快速混合技术研究酶反应的预稳态动力学 Lars Konermann and D.J.Douglas
第一节 引言
第二节 电喷雾离子化质谱法
第三节 电喷雾质谱在线快速混合法监测木聚糖酶的预稳态动力学
第四节 停留电喷雾质谱法
第五节 结论
参考文献
第四部分 用于酶反应过程的同位素探针
第十六章 同位素探针法阐明酶催化作用 D.L.Purich and R.D.Allison
第一节 引言和新进展
第二节 处于平衡态的系统
第三节 远离平衡的酶系统
第四节 影响交换行为的酶相互作用
第五节 结论
参考文献
第十七章 位置同位素交换作为检测酶作用的探针 L.S.Mullins and F.M.Raushel
第一节 引言
第二节 用于位置同位素交换(PIX)的功能基
第三节 定性定量方法
第四节 非标记底物和产物的变异
第五节 摘要
参考文献
第十八章 酶的过渡态分析和过渡态类似物 V.L.Schramm
第一节 引言
第二节 酶的过渡态的本质
第三节 过渡态结合能
第四节 经受过渡态分析检验的化学
第五节 酶过渡态分析的实验步骤和抑制剂设计
第六节 同位素标记底物的合成:核苷和核苷酸代谢
第七节 动力学同位素效应的实验测量
第八节 测量保证因子和结合同位素效应
第九节 固有动力学同位素效应与过渡态结构的匹配
第十节 底物和过渡态的分子静电势(MEP)表面
第十一节 设计过渡态抑制剂
第十二节 结论
参考文献
第十九章 由动力学同位素效应测定过渡态 P.J.Berti
第一节 引言
第二节 理论
第三节 由动力学同位素效应到过渡态结构的路线
第四节 摘要
参考文献
第二十章 过渡态和抑制剂识别的计算方法 B.B.Braunheim and S.D.Schwartz
第一节 引言
第二节 相似性测量
第三节 相似性测量结果和讨论
第四节 神经系统网络
第五节 分子重要性和海登层量级
第六节 结论
参考文献
附录
索引