本教程包含了生物化学与分子生物学的实验内容,是帮助学生验证生物化学与分子生物学的理论、理解生物化学原理以及掌握分子生物学方法的理论和实验技术操作的指导用书。
本教程第一章介绍了生物化学与分子生物学实验操作的基本要求和常用仪器的使用与维护;第二章设计了糖类、脂类、蛋白质等方面的经典生物化学与分子牛物学实验;第三章涉及Western blotting、RT-PCR以RNA的操作技术和基因组编辑技术等日前热门的生物化学与分子生物学技术:第四章安排了实践性强的实验:第五章对计算机仿真技术做了必要的介绍。
样章试读
目录
- 目录
第一章生物化学与分子生物学实验的基本要求1
第二章验证性实验18
第一节糖类的化学18
实验一还原糖和总糖的测定-3,5-二硝基水杨酸比色法18
实验二总糖的测定——蒽酮比色法20
第二节脂类的化学22
实验三粗脂肪的提取和定量测定22
实验四血清总胆固醇的测定——邻苯二甲醛法23
第三节蛋白质的化学25
实验五蛋白质的性质实验——蛋白质及氨基酸的呈色反应25
实验六蛋白质的含量测定29
实验七氨基酸的分离鉴定——纸层析法37
实验八SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定未知蛋白质相对分子质38
实验九等电聚焦电泳测定蛋白质等电点41
第四节核酸的化学44
实验十紫外吸收法测定核酸的含量44
实验十一质粒DNA的酶切与鉴定45
实验十二聚合酶链式反应技术(PCR)48
实验十三小鼠肝脏中核酸的提取与鉴定50
实验十四菜花(花椰莱)中核酸的提取与鉴定52
第五节酶55
实验十五酶的特性55
实验十六底物浓度对酶促反应速度的影响一一米氏常数酌测定58
实验十七氨基转换反应——谷丙转氨酶活性鉴定(纸层析法)60
实验十八乳酸脱氢酶粗提液的制备及活力测定62
实验十九枯草杆菌蛋白酶活力测定65
第六节新陈代谢67
实验二十肌糖原的酵解作用67
实验二十一脂肪酸p-氧化69
第三章综合实验72
实验二十二血清甘油三酯的含量测定72
实验二十三外源基因在大肠杆菌的诱导表达及其表达产物的初步纯化74
实验二十四蛋白质免疫印迹技术77
实验二十五免疫共沉淀81
实验二十六肝细胞总RNA提取与鉴定85
实验二十七RT-PCR技术88
实验二十八基因组编辑技术91
第四章自主设计实验97
实验二十九自血清中分离及纯化抗体(IgG)97
实验三十从动物毛发中提取DNA进行指纹图谱分析99
实验三十一表皮生长因子-绿色荧光蛋白基因重组及蛋白原核表达101
第五章仿真实验介绍104
实验三十二蛋白质免疫印迹技术105
附录一常见的实验仪器、方法及基本原理110
第一节分光光度法与分光光度计110
第二节离心技术与离心机113
第三节电泳技术与电泳仪117
第四节层析技术与层析柱121
附录二常用缓冲溶液的配制方法132
附录三常用酸碱指示剂137
附录四标准溶液的配制和标定138
参考文献140