本书是一本较为全面、系统的RNA研究技术方面的实验手册,全书包括RNA工具酶、RNA提取纯化、RNA合成和加工、RNA体外翻译、RNA分析、RNA修饰、反义技术、核酶和脱氧核酶、RNA干涉与miRNA、SELEX技术、RNA结合与作用蛋白制备及功能、RNA与蛋白质相互作用、RNA二级结构预测和RNA网上资源等内容,具有全面性、系统性和新颖性。
本书可供分子生物学、生物化学、细胞生物学、分子遗传学、微生物学、生物技术、医药卫生以及农、林、牧等方面的科研、教学、技术人员及研究生参考使用。
样章试读
目录
- 贺福初序
孙志贤序
前言
第一章 RNA工具酶
第一节 RNA聚合酶
第二节 RNA酶
第三节 T4RNA连接酶
第四节 反转录酶
第五节 RNA酶抑制剂
第二章 RNA提取纯化
第一节 动物组织细胞RNA的分离
第二节 植物RNA的分离
第三节 果蝇RNA的制备
第四节 秀丽新小杆线虫RNA制备
第五节 酵母RNA分离
第六节 真菌总RNA的制备
第七节 细菌RNA分离
第八节 病毒RNA分离
第九节 从聚丙烯酰胺凝胶中回收RNA片段
第十节 RNA在甲酰胺中的溶解保存
第三章 RNA合成与加工
第一节 RNA体外转录
第二节 一种简单有效的降低RNA 3端异质性的转录方法
第三节 核转录分析
第四节 RNA放射性标记
第五节 RNA反转录
第六节 RNA分子连接
第七节 核酶切割RNA专一位点
第八节 脱氧核酶切割RNA专一位点
第九节 mRNA 3′末端体外加工
第四章 mRNA体外翻译
第一节 mRNA在网织红细胞裂解液中的翻译
第二节 mRNA在麦胚提取物中的翻译
第三节 非洲爪蟾卵母细胞体外翻译系统
第四节 原核细胞体外翻译系统
第五节 体外转录与体外翻译耦联的快速反应系统
第六节 体外无细胞体系翻译病毒mRNA
第五章 RNA分析
第一节 RNA光谱分析与定量
第二节 RNA电泳
第三节 Northern Blot
第四节 斑点和狭缝杂交
第五节 RNA S1核酸酶作图
第六节 引物延伸法RNA分析
第七节 RNA原位杂交
第八节 RNaseA/T1保护和RNase H聚焦法
第九节 Fe(II)-EDTA保护测定法
第十节 PAT法分析mRNA poly(A)尾长度
第六章 RNA修饰
第一节 光活化的核苷酸类似物介导的RNA-蛋白的交联
第二节 亚甲基蓝介导的光交联反应检测蛋白质与双链RNA的相互作用
第三节 补骨脂素介导的光交联反应研究RNA与蛋白质分子间的作用
第七章 反义核酸技术、核酶与脱氧核酶
第一节 反义核酸技术
第二节 核酶
第三节 脱氧核酶
第八章 RNA干涉和miRNA
第一节 RNA干涉
第二节 miRNA
第九章 SELEX技术
第一节 随机RNA文库的SELEX筛选
第二节 单链DNA文库的SELEX筛选
第十章 与RNA结合并相互作用的蛋白质的制备及其功能研究
第一节 通过高等真核生物无细胞抽提物分析mRNA的降解
第二节 用RNA的免疫沉淀-rPCR方法进行体内分离核糖核蛋白复合体
第三节 反义亲和层析法纯化及去除核蛋白复合物
第四节 U系列小核糖核蛋白颗粒的纯化
第五节 不均一核糖核蛋白复合物的制备
第六节 纯化剪接因子SR蛋白
第七节 制备体外剪接反应用HeLa细胞核和胞质S100提取物
第八节 哺乳动物细胞体外剪接分析
第九节 酵母前体mRNA剪接提取物
第十节 前剪接体和剪接体的分离及分析
第十一节 酵母剪接体分析
第十一章 RNA与蛋白质相互作用
第一节 抑制细菌转录终止检测技术筛选RNA结合蛋白
第二节 利用大肠杆菌系统检测RNA与RNA结合蛋白的相互作用
第三节 噬菌体展示技术研究RNA结合蛋白
第四节 天然RNA文库筛选与蛋白特异性结合的RNA序列
第五节 Northwestern筛选蛋白表达文库
第六节 液相法筛选cDNA表达文库中RNA结合蛋白
第七节 酵母三杂交系统检测和分析RNA-蛋白相互作用
第八节 采用PACE分析RNA-肽相互作用
第九节 RNA足迹和修饰干扰分析
第十节 RNA-蛋白复合物中寡核苷酸靶向的RNase H切割保护实验
第十一节 硝酸纤维素滤膜结合实验确定RNA-蛋白质解离常数
第十二节 凝胶阻滞实验分析RNA-蛋白质作用常数
第十二章 RNA二级结构预测
第一节 概述
第二节 常用RNA二级结构预测软件的使用方法
第三节 pBV220载体中外源基因高效表达设计步骤
第十三章 RNA网上资源
第一节 综合网站
第二节 其他网站
附录
索引