因为RNA自身的复杂性,以及它广泛参与代谢调控,RNA生命周期的研究需要能够定位RNA的工具,使得RNA可以在原位,最好是在活体条件下被观察到。在《RNA检测与可视化:研究方法与实验方案》一书中,由最优秀的和最有发展前途的研究者提供了mRNA的检测和可视化方面最新的、最全面的基本方法和实验方案。这些方法可用于从细菌到哺乳类细胞的所有生物样品,既可用于固定细胞,也可用于活体细胞。本书涵盖了经典的原位杂交和先进的活体成像技术、细胞分选和亲和纯化程序,以及生物信息学工具。它为研究者提供了最完整的、最大规模的研究工具,既适合初涉者,也适用于专业人士。本书秉承Springer《分子生物学方法》系列丛书的一贯风格、阐述明晰、便于使用,各章包括内容简介、必备材料、易于操作的实验方案、疑难问题的注意事项,以及如何避免常见错误。
样章试读
目录
- 前言
撰稿人
第一部分 mRNA的原位可视化
1.RNA原位单分子成像
2.FISH和衣滴虫的免疫荧光染色
3.果蝇原位杂交中的高荧光分辨率
4.原位杂交检测母系mRNA定位并锚定于海鞘卵和晶胚中的皮层结构
5.爪蟾卵中mRNA定位的可视化
6.斑马鱼胚胎中mRNA表达的可视化
7.原位杂交检测失活和活体内神经元间隔中mRNA的高分辨率荧光
8.脊椎动物轴突中mRNA的原位杂交定位
第二部分 用分子探针或重组荧光蛋白进行活体mRNA的可视化
9.微分子信标用于活体内mRNA的检测
10.活细胞成像和RNA分析中分子信标的导入
11.用于活细胞中内源mRNA成像的遗传编码的荧光探针
12.单个细菌细胞中诱导RNA的可视化
第三部分 使用适体和完整的荧光蛋白进行活体mRNA的可视化
13.固定的和活酵母细胞中mRNA的可视化
14.使用UIA-标记RNA体系在活体内进行RNA的可视化
15.使用m-TAG(基于PCR的RNA适体融合)和荧光显微成像标记RNA系统进行活酵母内源mRNA的可视化
16.哺乳类活细胞中mRNA的成像技术
17.使用mRNA-MS2/MS2CP-FP系统研究果蝇卵子发生过程中mRNA的转运
第四部分 使用细胞分选来证明RNA的亚细胞定位
18.基因组范围内分析从分离的线粒体中萃取的RNA
19.通过细胞分选分析定位于内质网膜的mRNA
20.用细胞分选和亲和纯化联合程序分离编码过氧化物酶Peroxisomal蛋白的mRNA
21.轴突mRNA转运的表达谱
22.用多孔聚碳酸酯滤膜从肿瘤细胞中纯化RNA
第五部分 mRNA的亲和纯化及反式因子的鉴定
23.RNA结合蛋白免疫纯化微阵列(RIP-Chip)分析定位RNA的表达谱
24.RaPID:为了鉴定存在于核糖核蛋白复合物中的RNA和蛋白因子的一种基于适体mRNA的亲和纯化技术
25.RIP:一种mRNA的定位技术
26.RNA与RNA-蛋白复合物的亲和纯化与定位研究中的RNA适体二重(dual)使用
第六部分 使用生物信息学鉴定RNA中的顺式作用模块和结构
27.保守RNA定位信号的鉴定与搜寻
28.计算机预测涉及转录后调控过程的RNA结构模块
索引