本书由十章四十三项实验组成,共分三篇:第一篇为基础性实验,共五章,包括生物化学与分子生物学实验基本操作、分光光度法、层析技术、电泳技术和印迹技术,其为生物化学与分子生物学实验中最基本的实验技能;第二篇为综合性实验,共五章,包括蛋白质定量分析方法学比较(Lowry改良法、考马斯亮蓝法等),酶分离纯化与动力学分析,DNA提取、扩增与测序、RNA提取与鉴定以及基因克隆,通过综合性实验介绍实验技术方法的应用;第三篇为研究性实验,包括胰岛素和肾上腺素对血糖及肝糖原的影响、血清γ-球蛋白的分离纯化与鉴定、青豌豆素的分离纯化与鉴定、外源基因在原核细胞的表达及蛋白质与DNA的相互作用分析。本书在阐明各类方法基本原理的同时,注重实验的具体操作和实例的应用。
样章试读
目录
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实验室总则 (1)
第一篇 基础性实验
第一章 生物化学与分子生物学实验基本操作 (3)
第二章 分光光度法 (8)
实验一 血清蛋白质含量测定 (13)
实验二 DNA及RNA含量测定 (14)
实验三 血糖浓度测定 (15)
实验四 血清甘油三酯测定 (16)
实验五 血清总胆固醇含量的测定 (17)
实验六 血清丙氨酸氨基转移酶活性测定 (18)
第三章 层析技术 (20)
实验七 聚酰胺薄膜层析技术——蛋白质及肽的N末端氨基酸DNS分析法 (22)
实验八 凝胶层析(分子筛层析法)分离蛋白质 (26)
实验九 离子交换层析分离氨基酸 (29)
实验十 亲和层析纯化血清IgG (31)
第四章 电泳技术 (33)
实验十一 血清蛋白乙酸纤维素薄膜电泳 (35)
实验十二 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白 (36)
实验十三 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清乳酸脱氢酶 (40)
实验十四 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量 (43)
实验十五 等电聚焦-聚丙烯酰胺凝胶平板电泳测定蛋白质等电点 (46)
实验十六 DNA琼脂糖凝胶电泳 (47)
第五章 印迹技术 (49)
实验十七 Southern印迹 (49)
实验十八 Northern印迹 (51)
实验十九 Western印迹 (52)
实验二十 非放射性Dig-dUTP标记DNA探针及杂交检测 (54)
第二篇 综合性实验
第六章 蛋白质定量分析方法学比较 (57)
实验二十一 Lowry改良法测定蛋白质浓度 (57)
实验二十二 考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度 (59)
实验二十三 二喹啉甲酸法测定蛋白质浓度 (60)
实验二十四 紫外分光光度法测定蛋白质浓度 (61)
第七章 酶分离纯化与动力学分析 (63)
实验二十五 碱性磷酸酶分离纯化及比活性测定 (65)
实验二十六 碱性磷酸酶初速度的测定 (69)
实验二十七 碱性磷酸酶Km值测定 (70)
实验二十八 pH、温度及抑制剂对碱性磷酸酶活性的影响 (73)
第八章 DNA提取、扩增与测序 (78)
实验二十九 质粒DNA的提取 (78)
实验三十 基因组DNA的提取 (79)
实验三十一 聚合酶链反应 (81)
实验三十二 DNA序列测定 (82)
第九章 RNA提取与鉴定 (86)
实验三十三 细胞RNA的提取 (86)
实验三十四 逆转录-聚合酶链反应 (88)
实验三十五 荧光定量PCR (89)
第十章 基因克隆 (91)
实验三十六 目的基因与质粒的限制性内切酶消化 (91)
实验三十七 目的基因与质粒DNA的连接 (92)
实验三十八 质粒DNA的转化和筛选 (93)
第三篇 研究性实验
实验三十九 胰岛素和肾上腺素对血糖及肝糖原的影响 (95)
实验四十 血清γ-球蛋白的分离纯化与鉴定 (97)
实验四十一 青豌豆素的分离纯化及其鉴定 (101)
实验四十二 外源基因在原核细胞的表达 (102)
实验四十三 蛋白质与DNA的相互作用分析 (105)
主要参考文献 (108)
附录 (109)