本书是细胞生物学实验教学改革的重要成果,从基础、综合和设计性三个层面设置实验37个。涵盖部分经典细胞生物学实验,并增添一些现代细胞和分子生物学新技术,内容包括光学及电子显微镜技术、细胞形态结构、细胞化学及组分分离、细胞分裂与PCC、细胞培养和转染、FISH、免疫印迹、酵母双杂、细胞同步化及凋亡诱导与检测等技术。
样章试读
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Contents
前言
实验室规则
细胞生物学实验绘图方法与要求
第一部分 基础性实验 1
实验1 普通显微镜及其使用 1
实验2 特殊显微镜及其使用 6
实验3 石蜡切片法制备光学显微标本 15
实验4 冰冻切片法制备光学显微标本 21
实验5 透射电子显微镜及样品制备 24
实验6 扫描电子显微镜及样品制备 29
实验7 细胞形态观察、大小测量和死活细胞鉴定 32
实验8 液泡系的超活染色与动态观察 34
实验9 线粒体超活染色技术与数目统计 36
实验10 细胞骨架观察——微丝观察 37
实验11 细胞骨架观察——微管观察 40
实验12 碱性磷酸酶和酸性磷酸酶染色技术 42
实验13 核仁组织区银染色技术(Ag-Nor染色法) 44
实验14 多糖的细胞化学显示法——PAS反应 46
实验15 DNA的细胞化学显示法——Feulgen反应 50
实验16 RNA的细胞化学显示法——Brachet反应 51
实验17 细胞器的分离与鉴定 53
实验18 动物细胞基因DNA组提取 56
实验19 植物细胞基因组DNA提取 58
实验20 酿酒酵母RNA提取 61
实验21 细胞无丝分裂和有丝分裂的形态观察 63
实验22 细胞减数分裂的形态观察 65
实验23 超前凝集染色体标本的制备与观察 69
实验24 细胞的原代培养 71
实验25 细胞的传代培养 74
实验26 细胞融合 76
实验27 流式细胞仪测定细胞DNA含量 77
第二部分 综合性实验 81
实验28 荧光原位杂交确定特定核酸序列的定位 81
实验29 磷酸钙沉淀法将DNA导入细胞 84
实验30 RT-PCR检测水稻肌动蛋白基因的表达 86
实验31 Western-Blot检测HeLa细胞HSP70表达 89
实验32 重组GFP在洋葱细胞中瞬时表达的观察(基因枪导入法) 94
实验33 蛋白质与蛋白质相互作用检测——酵母双杂交筛选 95
第三部分 设计性实验 103
实验34 不同类群细胞大小和结构的比较 103
实验35 植物细胞中叶绿体的原位观察 106
实验36 不同方法制备同步化细胞的效果比较 108
实验37 细胞凋亡的诱导和检测 111
附录 117
附录一 离心机转数与离心力的换算表 117
附录二 常用溶液的配制和使用 118
附录三 生物标本常用染料性能简介 130
附录四 常用玻璃、塑料仪器的清洗和干燥 133
附录五 常用单位 135
附录六 药品规格 136
参考文献 137