本教材率先融汇了中国科学院广州生物医药与健康研究院本科教学中的实验指导内容,旨在培养学生生物化学与分子生物学、干细胞生物学、实验动物学等实验技能。本教材分为三篇:第一篇简要介绍常用仪器设备及基本实验技术、生物学实验室安全与管理;第二篇为基础实验,包括生物化学与分子生物学实验、生物技术实验,对每个实验的实验目的、原理、试剂和器材、实验步骤以及注意事项等详细描述;第三篇为创新实验,包括干细胞生物学概论、发育生物学实验和实验动物学内容。
样章试读
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第一篇 绪论
第一章 常用仪器设备及基本实验技术 1
第一节 显微镜的结构和使用方法 1
第二节 离心机的基本原理与使用方法 7
第三节 分光光度计与酶标仪的原理与使用方法 10
第四节 核酸电泳与蛋白电泳的原理与使用方法 15
第五节 聚合酶链反应仪与荧光定量聚合酶链反应仪的原理与使用方法 26
第二章 生物学实验室安全与管理 32
第一节 实验室安全概述 32
第二节 高压灭菌器使用的注意事项 33
第三节 实验室生物安全防护 35
第四节 危险化学品使用的注意事项 36
第五节 培养箱使用的注意事项 37
第六节 实验动物的安全管理和注意事项 38
第二篇 基 础 实 验
第三章 生物化学与分子生物学实验 40
实验一 β-半乳糖苷酶活性的测定方法 40
实验二 BCA法和紫外分光光度法测定蛋白质浓度 42
实验三 聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测工程菌中绿色荧光蛋白的表达 44
实验四 蛋白质印迹分析 47
实验五 RNA的提取与电泳鉴定 52
实验六 反转录PCR 54
实验七 肾上腺素、胰岛素对兔血糖浓度的影响 57
实验八 质粒DNA的提取与鉴定 59
第四章 生物技术实验 62
实验九 培养基的配制与灭菌技术 62
实验十 微生物的培养与保种技术 63
实验十一 噬菌体的分离及效价测定 69
实验十二 真核细胞转染 71
实验十三 单核苷酸多态性实验 74
实验十四 染色质免疫共沉淀技术 75
实验十五 发酵法制备发酵乳 78
实验十六 细胞培养技术 79
实验十七 细胞的冻存和复苏 84
实验十八 细胞计数和细胞活力检测 85
实验十九 CCK-8法检测细胞活性 87
实验二十 细胞凋亡的形态学观察 89
实验二十一 流式细胞仪检测细胞凋亡——Annexin V/PI双染色法 91
实验二十二 ELISA法检测肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)的含量 92
实验二十三 双转染报告系统的检测 94
实验二十四 彗星实验检测细胞DNA的损伤 96
实验二十五 离子交换柱层析法分离氨基酸 98
实验二十六 免疫荧光染色 100
实验二十七 免疫组织化学染色 101
实验二十八 固定化酵母细胞蔗糖酶活性测定 103
实验二十九 免疫共沉淀技术 104
第三篇 创新实验
第五章 干细胞生物学概论 107
实验三十 小鼠胚胎干细胞的体外培养 107
实验三十一 人类胚胎干细胞的衍化生成 110
实验三十二 健康人体尿液中提取细胞分离、培养实验 112
实验三十三 诱导多能干细胞实验——小鼠iPS细胞系的建立 113
实验三十四 碱性磷酸酶染色法检测 iPS 细胞多能性 116
第六章 发育生物学实验 118
实验三十五 斑马鱼胚胎红细胞活体染色 118
实验三十六 斑马鱼软骨染色观察 119
实验三十七 斑马鱼囊胚中期转换前后胰岛素蛋白的表达差异 120
第七章 实验动物学 122
实验三十八 小鼠学习及记忆检测的行为学实验:水迷宫 122
实验三十九 小鼠高架十字迷宫行为学检测 125
实验四十 小鼠强迫游泳行为学测试 126
实验四十一 小鼠悬尾行为学测试 128
实验四十二 小鼠糖水偏好行为学测试 129
实验四十三 利用光遗传学技术调控小鼠搔痒行为实验 131
实验四十四 小鼠脑部的立体定向手术及药物微量注射 133
参考文献 138