本书在第四版多年使用的基础上进行了全面修订。全书共100多个实验,内容设置与陈钧辉教授等编著的《普通生物化学》第五版教材一致,包括糖、脂、蛋白质、核酸、酶、维生素、激素、物质代谢与生物氧化,以及为培养学生应用能力和创新能力的综合实验,非常适合作为本科教学的同步教材。为进一步拓宽学生的知识面,我们将与本书配套的一些生物化学仪器分析的内容放在科学出版社教学服务网站上,网站上还有16个生物化学实验操作流程的视频,供学生观看。
样章试读
目录
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第五版前言
第四版前言
第一章 糖类 1
实验1 糖的颜色反应 1
实验1.1 莫氏实验 1
实验1.2 塞氏实验 2
实验1.3 杜氏实验 3
实验2 糖的还原作用 4
实验3 血糖的定量测定(Folin-Wu法) 5
实验4 血糖的定量测定(Folin-Malmros法) 7
实验5 血糖的定量测定(葡萄糖氧化酶法) 9
实验6 血液中葡萄糖的测定(邻甲苯胺法) 11
实验7 葡萄糖含量测定(苯酚法) 13
实验8 蒽酮比色定糖法 14
实验9 植物组织中可溶性总糖的测定(蒽酮比色法) 16
实验10 总糖和还原糖的测定(3,5-二硝基水杨酸法) 18
实验11 多糖的实验 20
实验12 果胶的提取与果胶含量的测定 21
实验13 肝素钠的定量测定 24
实验14 糖的旋光性和变旋现象 26
第二章 脂质 28
实验15 脂肪的组成 28
实验16 卵磷脂的提取和鉴定 30
实验17 粗脂肪含量的测定(Soxhlet抽提法) 30
实验18 碘价的测定(Hanus法) 33
实验19 皂化价的测定 35
实验20 脂肪酸价的测定 37
实验21 脂肪乙酰价的测定 38
实验22 血清胆固醇的定量测定(磷硫铁法) 39
实验23 血清总胆固醇的测定(邻苯二甲醛法) 41
实验24 血清胆固醇的定量测定(醋酸酐法) 42
实验25 血清甘油三酯简易测定法 44
实验26 血清甘油三酯的测定(GPO-PAP法) 46
实验27 丙二醛(MDA)的测定 48
第三章 蛋白质 51
实验28 蛋白质的颜色反应 51
实验29 蛋白质的沉淀反应 54
实验30 蛋白质浓度测定(微量凯氏定氮法) 55
实验31 蛋白质浓度测定(双缩脲法) 58
实验32 蛋白质浓度测定(Folin-酚试剂法) 60
实验33 蛋白质浓度测定(紫外光吸收法) 61
实验34 蛋白质浓度测定(考马斯亮蓝结合法) 63
实验35 非蛋白氮(NPN)的测定 64
实验36 甲醛滴定法 66
实验37 DNP氨基酸的制备和鉴定 68
实验38 DNS氨基酸的制备和鉴定 71
实验39 用DNS法鉴定蛋白质或多肽的N 端氨基酸 73
实验40 用DNS法测定多肽的氨基酸组成 76
实验41 肽的序列分析(PTH法) 77
实验42 甲硫氨酰甘氨酸二肽的合成 80
实验43 尿素对蛋白质的变性作用 82
实验44 氨基酸纸层析法 84
实验45 氨基酸微晶纤维素薄板层析法 87
实验46 离子交换柱层析法分离氨基酸 88
实验47 血清白蛋白的分离与纯化 90
实验48 凝胶层析法分离纯化蛋白质 93
实验49 DEAE-SephadexA-25分离纯化多肽 95
实验50 亲和层析法分离纯化单克隆抗体 97
实验51 醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质 98
实验52 血清糖蛋白醋酸纤维薄膜电泳 101
实验53 牛乳中酪蛋白和乳糖的制备与鉴定 103
实验54 聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳法分离血清蛋白质 105
实验55 聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳法鉴定胰岛素 108
实验56 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的相对分子质量 110
实验57 用等电聚焦电泳法测定蛋白质等电点 114
实验58 对流免疫电泳法测定胎儿甲种蛋白质 116
实验59 火箭免疫电泳法 118
实验60 Western印迹 119
实验61 酶联免疫吸附测定(ELISA) 121
第四章 核酸 124
实验62 核酸的定量测定(定磷法) 124
实验63 酵母RNA的提取 126
实验64 RNA的定量测定(苔黑酚法) 127
实验65 动物肝脏中DNA的提取 129
实验66 DNA的定量测定(二苯胺法) 130
实验67 5′-核苷酸的定量测定(过碘酸氧化法) 132
实验68 DEAE纤维素薄板层析法测定核苷酸 134
实验69 腺苷三磷酸的定量测定(纸电泳法) 136
实验70 核酸的酶法降解以及葡聚糖凝胶层析法制备5′-单核苷酸 138
实验71 质粒DNA的提取 139
实验72 DNA琼脂糖凝胶电泳 141
第五章 酶 144
实验73 影响酶促反应的因素——温度、pH、激活剂及抑制剂 144
实验74 胰蛋白酶米氏常数的测定 147
实验75 胆碱酯酶米氏常数的测定 150
实验76 过氧化氢酶米氏常数的测定 152
实验77 用正交法测定几种因素对酶活力的影响 153
实验78 胰蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氯对胰蛋白酶的抑制作用 156
实验79 溶菌酶的提纯结晶和活力测定 159
实验80 猪胰糜蛋白酶的制备和纯度鉴定 161
实验81 大肠杆菌碱性磷酸酶的制备 163
实验82 碱性磷酸酶的提取和分离及比活力测定 166
实验83 琼脂糖凝胶电泳法分离乳酸脱氢酶同工酶 170
实验84 聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离乳酸脱氢酶同工酶 172
实验85 肝脏谷丙转氨酶活力测定 174
实验86 血清谷丙转氨酶活力测定 177
实验87 固定化5′-磷酸二酯酶的制备及其在分离核苷酸中的应用 178
第六章 维生素 184
实验88 维生素A的定性测定 184
实验89 维生素B1 的定性测定 185
实验90 维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法) 186
实验91 维生素C的定量测定(磷钼酸法) 188
实验92 核黄素(维生素B2)荧光光度定量测定法 190
实验93 胡萝卜素的定量测定 192
实验94 荧光法测定核黄素结合蛋白核黄素的解离常数 194
第七章 激素 197
实验95 尿中17-羟皮质类固醇的测定(Porter-Silber法) 197
第八章 物质代谢与生物氧化 200
实验96 肌糖原的酵解作用 200
实验97 脂肪酸的β-氧化 202
实验98 华氏(Warburg)呼吸仪瓶常数的测定 204
实验99 L-谷氨酸的酶促脱羧作用(测压法测定L-谷氨酸) 206
实验100 发酵过程中无机磷的被利用和ATP的生成(ATP的生物合成) 208
第九章 综合实验 211
实验101 用高效液相层析(HPLC)定量测定胰岛素中的氨基酸 211
实验101.1 胰岛素的酸水解 211
实验101.2 用HPLC定量测定胰岛素水解产物中的氨基酸 212
实验102 维生素C对过氧化氢(H2O2)诱导的小鼠巨噬细胞氧化损伤的保护作用 214
实验102.1 小鼠腹腔巨噬细胞的收集与培养 214
实验102.2 MTT法测定巨噬细胞死亡率 216
实验102.3 活性氧检测试剂盒探测细胞内活性氧的水平 217
实验102.4 NO和NO合成酶活性的测定 219
实验103 酵母醇脱氢酶的提纯及其性质的研究 220
实验103.1 酵母醇脱氢酶的提纯 220
实验103.2 酵母醇脱氢酶的凝胶层析 223
实验103.3 酵母醇脱氢酶的专一性 224
实验103.4 酵母醇脱氢酶的动力学研究 226
实验104 α-淀粉酶的分离纯化、鉴定和Km、Vmax的测定 231
实验104.1 α-淀粉酶的活力测定 232
实验104.2 α-淀粉酶的疏水层析 234
实验104.3 α-淀粉酶的离子交换柱层析 236
实验104.4 聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳法鉴定α-淀粉酶 238
实验104.5 米氏常数(Km)和最大反应速度(Vmax)的测定 240
实验105 螺旋藻藻蓝蛋白的分离、纯化与鉴定 242
实验105.1 螺旋藻粗藻蓝蛋白的制备 242
实验105.2 离子交换柱层析法分离藻蓝蛋白 243
实验106 原花色素的提取、纯化与测定 244
实验106.1 山楂原花色素的提取 245
实验106.2 原花色素的测定(Ⅰ) 246
实验106.3 原花色素的测定(Ⅱ) 248
实验107 熊果酸的制备和测定 249
实验107.1 山楂熊果酸的制备 249
实验107.2 熊果酸含量测定 250
实验108 镍化合物诱导人Jurkat细胞凋亡途径的研究 252
实验108.1 Jurkat细胞的培养 252
实验108.2 Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡 253
实验108.3 RT-PCR检测凋亡相关基因bcl-2的表达 255
实验108.4 酶联免疫吸附检测Bcl-2蛋白表达水平 257
第十章 临床生化指标的自动测定(见科学出版社教学服务网站) 260
附录 261
一、生物化学实验须知 261
二、玻璃仪器的洗涤及一些常用的洗涤剂 262
三、移液器的使用 263
四、吸管的使用 265
五、过滤和离心 265
六、930型荧光光度计的使用 266
七、UV2600紫外可见分光光度计的使用 268
八、自动生化分析仪(见科学出版社教学服务网站) 271
九、全自动免疫分析仪TOSOH AIA 2000标准化操作规程(见科学出版社教学服务网站) 271
十、血红蛋白检测仪Bio-Rad D-10标准化操作规程(见科学出版社教学服务网站) 271
十一、实验室常用酸碱的相对密度和浓度 271
十二、常用酸碱指示剂 271
十三、缓冲液的配制 272
十四、恒沸盐酸的制备 278
十五、大肠杆菌丙酮粉的制备 278
十六、生物化学中某些重要化合物的Mr及pK值 279
十七、氨基酸的一些物理常数 281
十八、某些蛋白质的物理性质 283
十九、化学元素的相对原子质量表 284
二十、离心机转速(r/min)与相对离心力(RCF)的换算 285
二十一、硫酸铵饱和度的常用表 287
二十二、常用离子交换剂 288
二十三、常用凝胶过滤层析介质 291
二十四、汞的密度 293