本书著者,于1992~1994年期间,以访问学者身份到美国Huisman教授的实验室研究血红蛋白病的基因诊断。1994年访美归来,在学校领导的建议下开展感染性疾病病原体的基因诊断。本书内容就是此项研究的成果:①创建一种提取DNA的通用裂解液,它能够处理各种不同的临床标本;②创建一种扩增DNA的通用反应液,它能够包容各种引物序列,达到有效扩增目的。联合使用这两个“通用”(通用裂解液、通用反应液),能够顺利完成各种PCR实验(普通PCR、多重PCR、通用引物PCR等)。多重PCR是为妇科感染等患者服务,它能够提高工作效率(一个扩增解决两个或更多基因),降低成本、减轻患者负担。通用引物PCR为脑炎、脑膜炎患儿服务,检测脑脊液里有无病原体,给病因诊断提供重要线索。
样章试读
目录
- 目 录
第一篇 PCR概况
第一章 PCR简史 1
第二章 PCR基本原理 3
第三章 PCR特点 5
第四章 PCR技术的新进展 6
第一节改进标本制备 6
第二节多重PCR 6
第三节通用引物PCR 6
第四节荧光定量PCR 7
第五章 PCR标本处理 8
第六章 PCR基本操作 9
第一节PCR扩增体系 9
第二节PCR扩增DNA操作举例 10
第三节PCR扩增产物的检测和分析 10
第四节琼脂糖凝胶电泳 11
第二篇 包医基因所PCR系统
第一章 简介 12
第二章 通用裂解液的制备 13
第三章 通用裂解液的应用 14
第一节由临床拭子(男、女拭子)提取DNA 14
第二节由组织标本提取DNA 14
第三节由尿液提取DNA 15
第四节全血标本提取DNA 15
第五节由痰液标本提取DNA 16
第六节从前列腺液或精液标本提取DNA 17
第七节由脑脊液或胸水提取DNA 17
第八节由血清或血浆标本提取DNA 18
第四章 通用反应液的配制 19
第一节通用反应液配制的基础操作 19
第二节通用反应液配制的活用操作 19
第五章 基础型※通用反应液的应用 21
第一节各种cDNA的扩增(此时不用通用裂解液) 21
第二节大批量科研标本的扩增(此时需要通用裂解液) 21
第六章 多孔琼脂糖凝胶电泳 23
第七章 凝胶的重复使用 25
第八章 包医PCR系统小结 26
第三篇 多重PCR
第一章 简介 27
第二章 白色念珠菌引物与加特纳菌引物的双重PCR 29
第三章 滴虫引物与解脲支原体引物的双重PCR 31
第四章 淋球菌引物与沙眼衣原体引物的双重PCR 33
第五章 发酵支原体引物与人型支原体引物的双重PCR 35
第六章 生殖道支原体引物与肺炎支原体引物的双重PCR 37
第七章 人乳头瘤病毒常见低危型引物的多重PCR 39
第八章 全面检测低危型人乳头瘤病毒(HPV-LRⅠ、Ⅱ) 41
第九章 一对引物扩增出六种常见高危型人乳头瘤病毒(161831335258) 43
第十章 全面检测高危型人乳头瘤病毒(HPV-HRⅠ、Ⅱ、Ⅲ) 45
第十一章 单纯疱疹病毒1型、2型(HSV-Ⅰ、HSV-Ⅱ) 47
第十二章 一对引物扩增出四种疱疹病毒(HSV-ⅠHSV-ⅡCMVEBV,简称HV-4) 49
第十三章 巨细胞病毒引物与弓形虫引物的双重PCR 51
第十四章 乳酸杆菌与细菌通用引物的多重PCR 53
第十五章 有关菌群失调的文章 55
妇女阴道分泌物乳酸杆菌与菌群比值的基因检测 55
第十六章 多重PCR小结 59
第四篇 通用引物PCR
第一章 简介 61
第二章 细菌通用引物PCR 62
第三章 真菌通用引物 64
第四章 衣原体通用引物 66
第五章 支原体通用引物 68
第六章 疱疹病毒通用引物 70
第七章 脑脊液中病原体基因诊断空白化验单 72
第八章 脑脊液病原体基因诊断Ⅰ 74
第九章 脑脊液病原体基因诊断Ⅱ 76
第十章 脑脊液病原体基因诊断Ⅲ 78
第十一章 脑脊液病原体基因诊断Ⅳ 80
第十二章 脑脊液病原体基因诊断Ⅴ 82
第十三章 通用引物PCR小结 84
第五篇 血红蛋白病的基因诊断
第一章 血红蛋白A2凉城的基因鉴定 85
第二章 血红蛋白Pyrgos和血红蛋白Legnano的基因鉴定 89
第三章 血红蛋白Fannin-Lubbock 92
第四章 有或无轻型β-地贫的杂合体中αQ-链变异物的数量问题 99
第五章 α-地贫与胎儿血红蛋白 103
第六篇 基因多态性研究
第一章 简介 106
第二章 内蒙古地区基因多态性分析 107
第一节内蒙古蒙古族人群血管紧张素Ⅰ转换酶(ACE)基因多态性分析 107
第二节蒙古族谷胱甘肽S-转移酶GSTT1和GSTM1基因多态性 111
第三节内蒙古地区汉族AITD与VitD受体基因多态性相关性分析 116
第四节包头地区汉族血管紧张素Ⅰ转换酶(ACE)基因多态性分析 121
第三章 基因多态性与银屑病的关系 126
第一节包头地区寻常型银屑病与HLA-Cw*0602等位基因的相关性研究 126
第二节包头汉族人HLA-DQA1基因型与寻常型银屑病的相关性研究 130
第三节内蒙古地区汉族血管紧张素转化酶(ACE)基因多态性与寻常型银屑病的相关性研究 133
第四节干扰素-γ+874位点基因多态性与银屑病的相关性研究 139
第五节包头地区寻常型银屑病与HLA-DRB1*0701等位基因的相关性研究 146
第六节银屑病的相关基因及因素的研究进展 151
第四章 基因多态性与心脑血管疾病的关系 158
第一节内蒙古包头地区汉族原发性高血压与HLA-DQA1*0301等位基因的相关性研究158
第二节包头汉族人群CX3CR1基因多态性研究 163
第三节内蒙古包头地区汉族血管紧张素转换酶基因插入/缺失多态性与冠心病关系的研究 168
第四节血管紧张素II1型受体基因A1166C多态性与脑梗死的关联研究 172
第五节血管紧张素II1型受体基因多态性与原发性高血压及脑梗死的关系 184
第六节过氧化物酶体增殖物受体与心血管疾病 188
第七节缺血性脑血管病趋化因子Fractalkine受体CX3CR1基因V249I多态性研究 188
第五章 基因多态性与糖尿病的关系201
第一节CDKAL1基因rs4712523多态性与内蒙古地区汉族人群2型糖尿病相关201
第二节内蒙古包头地区汉族人血管紧张素转换酶基因与糖尿病肾病的相关性研究204
第三节TCF7L2基因rs7903146T/C和rs7901695T/C单核苷酸多态性与内蒙古汉族人群2型糖尿病易感性的相关性研究 210
第四节2型糖尿病肾病与PPAR-γ2Pro12Ala单核苷酸多态性的相关性研究 215
第五节包头地区过氧化物酶体增殖体受体γ2基因多态性与2型糖尿病并发冠心病的相关性研究 218
第六节包头地区PPAR-γ2基因多态性与2型糖尿病合并冠心病的相关性研究 222
第七节PPAR-γ2Pro12Ala基因多态性与2型糖尿病肥胖的相关性研究 226
第六章 基因多态性与甲状腺疾病的关系 231
第一节包头地区TGF-β1基因+869T/C多态性与甲状腺疾病关系的研究 231
第二节TRAIL基因多态性与甲状腺疾病的临床试验研究 236
第三节转化生长因子-β1基因+869T/C位点的多态性与自身免疫性甲状腺疾病的关系243
第四节TRAIL与甲状腺疾病的相关性研究 248
第七章 基因多态性与慢性支气管及肺疾病的关系 253
第一节CYP2A6基因多态性与慢性阻塞性肺疾病的相关性研究 253
第二节干扰素gamma(IFN-γ)基因多态性与内蒙古地区汉族人群慢性阻塞性肺疾病(COPD)的相关性研究 258
第三节支气管哮喘与糖皮质激素受体基因多态性的关系 263
第四节CC16基因38A/G多态性与慢性阻塞性肺疾病的相关性研究 268
第八章 基因多态性与肾脏疾病的关系 272
第一节GSTT1基因多态性与IgA肾病易感性的研究 272
第二节PAI-1基因4G/5G多态性与内蒙古地区IgA肾病的相关性研究 275
第三节干扰素-γ基因多态性与IgA肾病临床、病理及预后的相关性 278
第四节内蒙古汉族TNFβ基因多态性与IgA肾病的相关性 284
第五节肌球蛋白重链9基因单核苷酸多态性与内蒙古自治区汉族IgA肾病临床、病理及预后的关系 288
第六节IgA肾病相关基因的研究进展 294
第七节内蒙古汉族IgA肾病患者TNFα、β基因多态性与临床特征、病理类型及预后关系的研究 297
第八节慢性肾脏病患者非肌性肌球蛋白重链9基因多态性与高血压易感性的研究 310
第九节肿瘤坏死因子β基因多态性与慢性肾功能衰竭的关联性研究 316
第十节内蒙古包头地区汉族人群肿瘤坏死因子α-308位点基因多态性与IgA肾病的相关性研究 321
第九章 基因多态性与牙周炎的关系 325
第一节CYP1A1基因MSPI酶切位点多态性与慢性重度牙周炎易感性的关系 325
第二节内蒙古地区慢性牙周炎与ACE基因插入/缺失多态性关系的研究 328
第三节GSTT1、GSTM1基因多态性与重度慢性牙周炎易感性关系的研究 333
第十章 妊高征孕妇血管紧张素转换酶基因多态性研究 339
第十一章 肿瘤基因研究 344
第一节C-erbB-2在贲门癌中的扩增及其临床意义 344
第二节差别PCR技术检测食管癌C-erbB-2原癌基因的研究 347
第三节差别PCR技术检测乳腺癌C-erbB-2癌基因扩增的研究 351
第四节BRCA1抑癌基因遗传不稳定性与大肠癌关系的研究 354