实验课是微生物学教学过程的重要一环。本书的内容分为5篇，包括细菌学实验、病毒学实验、真菌学实验、其他病原微生物实验和基本分子微生物学技术，共计71项实验内容。每项实验具体介绍了实验目的、实验原理、实验材料、实验方法与步骤及注意事项，具有良好的可操作性。书后的附录列出了微生物学实验室常用的试剂配制方法、培养基制备方法、菌种保藏方法，以及实验动物管理的相关内容，便于广大师生查阅参考。 分子克隆技术30多年来一直是全球生命科学领域实验室专业技术的基础。冷泉港实验室出版社出版的《分子克隆实验指南》一书拥有的可靠性和权威性，使本书成为业内最流行、最具影响力的实验室操作指南。
第四版的《分子克隆实验指南》保留了之前版本中备受赞誉的细节和准确性，10个原有的核心章节经过更新，反映了标准技术的发展和创新，并介绍了一些前沿的操作步骤。同时还修订了第三版中的核心章节，以突出现有的核酸制备和克隆、基因转移及表达分析的策略和方法，并增加了12个新章节，专门介绍最激动人心的研究策略，包括利用DNA甲基化技术和染色质免疫沉淀的表观遗传学分析、RNAi、新一代测序技术，以及如何处理数据生成和分析的生物信息学，例如介绍了分析工具的使用，如何比较基因和蛋白质的序列，鉴定多个基因的常见表达模式等。本书还保留了必不可少的附录，包括试剂和缓冲液、常用技术、检测系统、一般安全原则和危险材料。 实验室的负责人要组建、领导研究团队，管理人事和机构，申请科研经费，同时还要出科研成果以保持学术的领先地位。但是，许多实验室管理者往往缺少经营管理意识以及相应的知识储备。本书为实验室管理者提供了全面的指导，通过对众多科研管理人员的访问及相关资料的搜集，运用生动而丰富的例证，讨论了一系列管理中具有挑战性的问题以及可以促进成功的技巧。
对于所有对实验室管理和实践感兴趣的愿意思考的读者，对于教育者、管理者以及仅仅是从兴趣出发的人，这本书都是不可不读的。 本书重点阐述了现代生物技术实验室的安全与管理。全书共分为4章，包括实验室电、气、化学试剂的安全使用，微生物实验室生物安全与管理，基因工程实验室的安全与管理和放射性同位素实验室的安全与管理。第2至4章后均附有相关的法律和法规。本书可作为高等院校生物技术相关专业的大专生、本科生、研究性的实验室安全教材，同时也是从事现代生物技术实验教学、科研及管理工作人员必不可少的工具书。分子克隆技术30多年来一直是全球生命科学领域实验室专业技术的基础。冷泉港实验室出版社出版的《分子克隆实验指南》一书拥有的可靠性和权威性，使本书成为业内最流行、最具影响力的实验室操作指南。
第四版的《分子克隆实验指南》保留了之前版本中备受赞誉的细节和准确性，10个原有的核心章节经过更新，反映了标准技术的发展和创新，并介绍了一些前沿的操作步骤。同时还修订了第三版中的核心章节，以突出现有的核酸制备和克隆、基因转移及表达分析的策略和方法，并增加了12个新章节，专门介绍最激动人心的研究策略，包括利用DNA甲基化技术和染色质免疫沉淀的表观遗传学分析、RNAi、新一代测序技术，以及如何处理数据生成和分析的生物信息学，例如介绍了分析工具的使用，如何比较基因和蛋白质的序列，鉴定多个基因的常见表达模式等。本书还保留了必不可少的附录，包括试剂和缓冲液、常用技术、检测系统、一般安全原则和危险材料。本书的第二版，作者大幅修改了文本，提供适应现代科研变化一些挑战性意见。新主题包括协作合同，绩效评估，与非科学家沟通，在任期内如何取得成功的轨道，以及良好的专业发展。该书对我国科研人员必将具有一次新的指导意义。 本书包括活细胞成像的基础理论、最新发展和实验指南。系统介绍了荧光蛋白的各种光谱变体，表达载体构建，活细胞成像用CCD相机的类型及工作原理，常用显微镜系统(如宽视场、共聚焦和转盘式共聚焦)，以及新一代超分辨率显微镜系统，图像处理方法和软件，各种定量成像等分析分子动力学的方法。作为实验指南，本书以各种不同细胞和生物体为对象给出了具体的成像实例，包括染色质、蛋白质和RNA的标记定位，蛋白质与蛋白质相互作用检测，金属离子和pH的生物传感器，脂类物质的标记等。 本书既可以作为活细胞成像领域的入门读物，又可以作为人类、动物、植物、昆虫和微生物等专业科研人员的理论基础读物和具体实验操作指南。 本书包括十三章内容和相关附录，详细介绍了遗传作图、基因分型、体细胞杂交、细胞遗传学、分子克隆、致病或易感基因定位克隆、临床遗传学与临床分子遗传学、肿瘤遗传学、转录组学、基因治疗载体、基因治疗策略等内容，分别介绍了相关的基础知识、科学原理、实验方法等。
本书是一本专门供从事遗传学及相关专业研究及教学的研究人员、研究生、教师等参考的实验书籍。 《分子克隆实验指南》的前两版以其无可匹敌的声誉，在近20年的时间里一直被作为分子生物学实验的经典参考书。在第三版中，作者对图书内容进行了完全的升级，修订了实验的每条方案，增加了大量新的材料，拓宽了它涉及的领域，内容丰富而详细，使其具有用于学习遗传学、分子细胞生物学、发育生物学、微生物学、神经科学和免疫学等科学的重要指导和参考价值。本书具有先进性、实用性、权威性的特点，是生命科学实验室内当之无愧的“圣经”。
本书可供生物学、医药卫生，以及农、林、牧等方面有关的科研、教学与技术人员参考。 神经生物学是生命科学的前沿，是应用神经解剖学、神经生理学、神经化学和分子生物学等多学科现代技术，对神经系统进行多层次综合研究的实验性科学。本书作为《生命科学实验指南系列》的重要分册，遵循理性思维与实际操作相结合的原则，全面而系统地介绍了神经生物学实验研究的方法学（第1篇），并将编著者20余年的有关科研成果转化为可操作的实验指导（第2篇），以及提供可供参考的有关实验研究信息（第3篇）。
本书适合高等医学院校研究生、七年制和五年制医学生及从事神经生物学的研究人员使用，对于普通高等院校生物系研究生与本科生及生物学工作者亦有很好的参考价值。生命过程的单分子研究是一个新兴的研究领域，常常清晰并令人惊奇地揭示出生物大分子的精细工作。本书在世界范围内首次较全面地介绍了单分子研究技术，主要涉及两大类技术，一是荧光成像和光谱学技术，二是基于力学的操作和检测。全书共分21章。第1章对单分子技术的发展做了回顾和展望，其余20章均以技术为主题，除扼要介绍相关理论外，主要是结合具体的研究实例较详细地介绍实验方法。本书语言清晰易懂，具有很强的实用性。
本书不仅对单分子生物学领域的专家具有重要的参考价值，更重要的是对那些想要在单分子领域做些研究的研究生、博士后及其他研究者也将会是极大的帮助。 本书是对分子生物学实验室工作的全面论述，内容涵盖实验室机构运作、软硬件配置以及实验操作过程、结果记录、数据提呈等方面，是实验室工作的指导性手册。为加强实验室的建设与管理，帮助实验室人员独立熟悉工作环境，更好地完成对实验室工作信息的收集、整理、统计与交流等方面发挥积极的作用。
本书忠实于原文，最大限度地反映了原书的风格与韵味。可作为高等院校高年级学生、研究生、实验室管理者以及分子生物学实验室工作人员的参考用书。 弗雷谢尼所著的《动物细胞培养——基本技术指南》历来被看做是该领域的领衔之作。自2000年第四版问世以来，细胞培养及其相关学科的技术方法发展更加迅猛，诸如干细胞、组织工程、克隆以及体外毒性检测方面等均取得长足的甚至突破性的进展，为将这些内容和其他方面的新的资料融入该书，于是有了新的一版——第五版的面世。
第五版除保留原有主要内容之外，为了适应细胞培养新手，尤其是生物制药工业中所涌现的技术人员的需要，专门新开辟了一章“培训纲要”，其中包括基本技能训练、高阶练习以及相关实践等。另外，如同前版一样，本版也详尽介绍了如下内容：原代培养、细胞系、传代、分化、癌细胞和细胞转化、三维培养、大规模培养、分子细胞学技术、污染、特殊设备、细胞培养中可能遇到的难题及对策等。因此，本版最大特色可以概括为全面、新颖和实用。
本书可供有关大学师生尤其是研究生、科研人员、生物工程技术人员、临床医生以及所有从事生命科学研究的人员参考。 本书包括基因工程中一些最基本的实验方法，例如DNA分析、RNA分析、克隆与亚克隆方法、PCR等，同时也介绍了诸如银染、非放射性标记、自动化DNA序列分析等新技术。本书对于专业科研人员来说可提供较新的技术参考材料，对于生物学、医学、药学等专业的本科生、研究生来说也是一本非常好的实验技术参考书，使读者在学习基因工程常规操作的同时能全面了解当前新技术的进展情况。
样章试读
目录
- 目录
医学微生物学实验室生物安全 1
医学微生物学实验的目的与要求 5
医学微生物学实验室规则 6
第一篇 细菌学实验
第一章 细菌的染色与形态、结构观察 9
实验一 油镜显微镜的使用及细菌形态结构的观察 9
实验二 细菌涂片标本的制备及简单染色法 12
实验三 细菌的革兰染色法 15
实验四 细菌特殊结构（芽胞、荚膜、鞭毛）的染色法 17
实验五 活菌运动观察 22
第二章 细菌的培养及其生化代谢产物的检查 24
实验六 细菌培养基的制备与灭菌实验 24
实验七 细菌的分离接种技术与培养方法 27
实验八 细菌培养物的性状观察 36
实验九 糖发酵实验 38
实验十 蛋白质代谢实验 41
实验十一 其他代谢实验 43
第三章 细菌的遗传与变异及耐药性实验 45
实验十二 噬菌体裂解细菌实验 45
实验十三 细菌的形态变异实验（L型、H-O变异、S-R变异） 49
实验十四 细菌的药物敏感性实验（纸片法、试管法） 52
实验十五 细菌耐药性质粒转化实验（化学转化和电转化） 56
第四章 动物实验 60
实验十六 小鼠腹腔接种方法——金黄色葡萄球菌小鼠腹腔接种方法 60
实验十七 小鼠尸体解剖与细菌学检查——金黄色葡萄球菌感染小鼠尸体解剖与细菌学检查 63
第五章 环境、体表细菌的检查及消毒与灭菌实验 66
实验十八 空气中细菌的检测（沉降法） 66
实验十九 正常人体皮肤及随身物品细菌的检查 68
实验二十 鼻咽腔及口腔中细菌的检查 71
实验二十一 消毒与灭菌实验 72
第六章 病原性球菌 78
实验二十二 病原性球菌的形态、染色性及培养特性 78
实验二十三 葡萄球菌血浆凝固酶实验 80
实验二十四 抗链球菌溶血素“O”（ASO）实验——乳胶凝集法 82
实验二十五 肺炎链球菌胆汁溶解实验 83
实验二十六 病原性球菌脓汁标本的检验 84
第七章 肠道杆菌 87
实验二十七 粪便标本的检验 87
实验二十八 肥达反应 93
第八章 霍乱弧菌和幽门螺杆菌 95
实验二十九 霍乱弧菌、副溶血弧菌的检验 95
实验三十 幽门螺杆菌、空肠弯曲菌的检验 98
第九章 呼吸道感染细菌的检验 101
实验三十一 结核分枝杆菌的检验 101
实验三十二 白喉棒状杆菌的检验 107
第十章 厌氧性细菌的检验 111
实验三十三 厌氧芽胞梭菌的形态、染色性及培养特性 111
实验三十四 无芽胞厌氧菌的形态、染色性及培养特性 114
实验三十五 破伤风外毒素与抗毒素中和实验 116
实验三十六 产气荚膜梭菌动物实验 117
实验三十七 临床标本厌氧菌的分离培养与鉴定 118
第十一章 动物源性细菌的检验 123
实验三十八 炭疽芽胞杆菌的检验 123
实验三十九 布鲁菌的检验 126
实验四十 鼠疫耶尔森菌的检验 128
第二篇 病毒学实验
第十二章 病毒的形态学观察 133
实验四十一 电子显微镜观察负染病毒 133
实验四十二 病毒包涵体的检查 136
第十三章 病毒的分离培养 139
实验四十三 病毒的组织细胞培养方法 139
实验四十四 病毒的鸡胚培养方法 143
实验四十五 病毒的动物接种 146
第十四章 病毒的感染性定量测定 148
实验四十六 病毒组织半数感染量（TCID50）的测定 148
实验四十七 病毒的空（蚀）斑形成实验 152
第十五章 病毒抗原的检测 155
实验四十八 直接免疫荧光实验 155
实验四十九 酶联免疫吸附实验——双抗体夹心法 157
实验五十 免疫印迹 159
第十六章 病毒抗体的检测 163
实验五十一 血凝实验与血凝抑制实验 163
实验五十二 补体结合实验 166
实验五十三 酶联免疫吸附实验 168
实验五十四 病毒中和实验 171
第十七章 病毒核酸的检测 173
实验五十五 聚合酶链反应定性检测病毒核酸 173
实验五十六 荧光定量PCR 检测病毒核酸 175
实验五十七 原位杂交法检测病毒核酸 178
第三篇 真菌学实验
实验五十八 真菌的培养及形态观察 183
实验五十九 真菌病临床标本的直接镜检与染色观察 185
实验六十 真菌DNA快速提取及18SrDNA序列测定鉴定 187
第四篇 其他病原微生物实验
实验六十一 支原体的检验 193
实验六十二 衣原体的检验 197
实验六十三 钩端螺旋体的检验 201
实验六十四 立克次体的检验 206
实验六十五 放线菌的检验 209
第五篇 基本分子微生物学技术
实验六十六 重组质粒构建 215
实验六十七 外源性蛋白的重组表达 220
实验六十八 细菌基因敲除技术 231
实验六十九 转座子技术 242
实验七十 荧光定量 PCR 245
实验七十一 菌群分析 252
附录
微生物学实验室常用的试剂 259
一、常用染色液的配制 259
二、常用培养基的制备 259
三、常用试剂和溶液的配制 267
四、洗涤液的配制与使用 271
五、常用消毒液和清洁液的配制法 272
菌种保藏 275
一、传代培养保藏法 275
二、液体石蜡覆盖保藏法 275
三、载体保藏法 276
四、悬液保藏法 277
五、寄主保藏法 278
六、冷冻保藏法 278
实验动物管理 281目录
上册
第1章 DNA的分离及定量 1
导言 2
方案1 SDS碱裂解法制备质粒DNA：少量制备 9
方案2 SDS碱裂解法制备质粒DNA：大量制备 12
方案3 从革兰氏阴性菌（如E.coli）中分离DNA 15
方案4 乙醇法沉淀DNA 17
方案5 异丙醇法沉淀DNA 21
方案6 用微量浓缩机进行核酸的浓缩和脱盐 22
方案7 丁醇抽提法浓缩核酸 23
方案8 聚乙二醇沉淀法制备M13 噬菌体单链DNA 24
方案9 M13噬菌体铺平板 27
方案10 M13噬菌体液体培养 30
方案11 M13噬菌体双链（复制型）DNA的制备 32
方案12 利用有机溶剂分离纯化高分子质量DNA 35
方案13 用蛋白酶K 和苯酚从哺乳动物细胞中分离高分子质量DNA 37
方案14 一步法同时提取细胞或组织中的DNA、RNA和蛋白质 43
方案15 从鼠尾或其他小样本中制备基因组DNA 46
替代方案：不使用有机溶剂从鼠尾分离DNA 48
替代方案：一管法从鼠尾中分离DNA 49
方案16 快速分离酵母DNA 50
方案17 微型凝胶电泳后使用溴化乙锭（EB）估算条带中DNA数量 52
方案18 利用Hoechst 33258通过荧光分析仪估算DNA浓度 53
方案19 用PicoGreen定量溶液中的DNA 55
信息栏 56
第2章 DNA分析 62
导言 63
方案1 琼脂糖凝胶电泳 73
方案2 琼脂糖凝胶中DNA的染色检测 76
方案3 聚丙烯酰胺凝胶电泳 80
方案4 聚丙烯酰胺凝胶中DNA的染色检测 85
方案5 聚丙烯酰胺凝胶中DNA的放射自显影检测 86
方案6 碱性琼脂糖凝胶电泳 87
附加方案：碱性琼脂糖凝胶的放射自显影 90
方案7 成像：放射自显影和感光成像 91
方案8 用玻璃珠从琼脂糖凝胶中回收DNA 96
方案9 低熔点琼脂糖凝胶中DNA的回收：有机溶剂抽提法 98
方案10 聚丙烯酰胺凝胶中DNA片段的回收：压碎与浸泡法 101
方案11 Southern印迹 103
方案12 Southern印迹：DNA从一块琼脂糖凝胶同时向两张膜转移 110
方案13 采用放射性标记探针对固定在膜上的核酸DNA进行Southern杂交 112
附加方案：从膜上洗脱探针 117
信息栏 119
第3章 质粒载体克隆与转化 122
导言 123
方案1 制备和转化感受态大肠杆菌的Hanahan 方法：高效转化策略 126
方案2 制备和转化感受态大肠杆菌的Inoue 方法：“超级感受态”细胞 131
方案3 大肠杆菌的简单转化：纳米颗粒介导的转化 135
替代方案：一步法制备感受态大肠杆菌：在同一溶液中转化和储存细菌细胞 136
方案4 电穿孔法转化大肠杆菌 138
方案5 质粒载体克隆：定向克隆 143
方案6 质粒载体克隆：平末端克隆 145
方案7 质粒DNA的去磷酸化 148
方案8 向平末端DNA添加磷酸化衔接子/接头 150
方案9 克隆PCR产物：向扩增DNA的末端添加限制性酶切位点 151
方案10 克隆PCR产物：平末端克隆 154
方案11 克隆PCR产物：制备T载体 157
方案12 克隆PCR产物：TA克隆 159
方案13 克隆PCR产物：TOPOTA克隆 161
方案14 使用X-Gal和IPTG筛选细菌菌落：α-互补 165
信息栏 167
第4章 Gateway重组克隆 205
导言 206
方案1 扩增Gateway载体 210
方案2 制备可读框入门克隆和目的克隆 213
方案3 应用多位点LR克隆反应制备目的克隆 219
信息栏 222
第5章 细菌人工染色体及其他高容量载体的应用 223
导言 224
方案1 BAC DNA的小量分离和PCR检验 235
方案2 BAC DNA的大量制备和线性化 238
方案3 通过脉冲电场凝胶电泳检验BAC DNA的质量和数量 241
方案4 两步BAC工程：穿梭载体DNA的制备 242
方案5 A同源臂（A-Box）和B同源臂（B-Box）的制备 244
方案6 克隆A和B同源臂到穿梭载体 247
方案7 重组穿梭载体的制备和检验 249
方案8 通过电穿孔法转化重组穿梭载体到感受态BAC宿主细胞 251
方案9 共合体的检验和重组BAC克隆的筛选 253
方案10 一步BAC修饰：质粒制备 256
方案11 A同源臂（A-Box）的制备 259
方案12 克隆A同源臂到报道穿梭载体 260
方案13 用RecA载体转化BAC宿主 263
方案14 转移报道载体到BAC/RecA细胞以及共合体的筛选 265
方案15 酿酒酵母（S.cerevisiae）的生长和DNA制备 267
方案16 酵母DNA的小量制备 269
信息栏 270
第6章 真核细胞RNA的提取、纯化和分析 275
导言 276
方案1 从哺乳动物的细胞和组织中提取总RNA 279
替代方案 从小量样本提取RNA 281
方案2 从斑马鱼胚胎和成体中提取总RNA 282
方案3 从黑腹果蝇提取总RNA 283
方案4 从秀丽隐杆线虫中提取总RNA 285
方案5 从酿酒酵母菌中采用热酸酚提取总RNA 287
方案6 RNA定量和储存 289
方案7 RNA的乙醇沉淀 295
方案8 通过无RNase的DNaseⅠ处理去除RNA样品中的DNA污染 297
方案9 Oligo（dT）磁珠法提取poly（A）+ mRNA 298
方案10 按照大小分离RNA：含甲醛的琼脂糖凝胶电泳 308
方案11 根据分子质量大小分离RNA：RNA的尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 312
方案12 琼脂糖凝胶中变性RNA的转膜和固定 319
替代方案 下行毛细管转移 323
方案13 聚丙烯酰胺凝胶的电转移和膜固定 325
方案14 Northern杂交 327
方案15 纯化RNA的点杂交和狭缝杂交 330
方案16 用核酸酶S1 对RNA作图 342
方案17 核糖核酸酶保护分析：用核糖核酸酶和放射性标记的RNA探针对RNA作图 349
方案18 引物延伸法分析RNA355
信息栏 359
第7章 聚合酶链反应 363
导言 364
方案1 基础PCR 375
方案2 热启动PCR 380
方案3 降落PCR 383
方案4 高GC含量模板的PCR扩增 385
方案5 长片段高保真PCR（LA PCR） 390
方案6 反向PCR 393
方案7 巢式PCR 397
方案8 mRNA反转录产物cDNA的扩增：两步法RT-PCR 400
方案9 由mRNA的5′端进行序列的快速扩增：5′-RACE 409
方案10 由mRNA的3′端进行序列的快速扩增：3′-RACE 416
方案11 使用PCR 筛选克隆 422
信息栏 424
第8章 生物信息学 431
导言 432
方案1 使用UCSC基因组浏览器将基因组注释可视化 434
方案2 使用BLAST和ClustalW进行序列比对和同源性检索 444
方案3 使用Primer3Plus设计PCR引物 450
方案4 使用微阵列和RNA-seq进行表达序列谱分析 461
方案5 将上亿短读段定位至参考基因组上 472
方案6 识别ChIP-seq数据集中富集的区域（寻峰） 483
方案7 发现顺式调控基序 495
信息栏 503
第9章 实时荧光聚合酶链反应定量检测DNA及RNA 509
导言 510
方案1 实时PCR反应用引物和探针浓度的优化 532
方案2 制作标准曲线 537
方案3 实时荧光PCR定量检测DNA 540
方案4 实时荧光PCR定量检测RNA 542
方案5 实时荧光PCR实验数据的分析和归一化 545
信息栏 550
第10章 核酸平台技术 551
导言 552
方案1 印制微阵列 560
方案2 Round A/Round B DNA扩增 564
方案3 核小体DNA和其他小于500bp的DNA的T7线性扩增（TLAD） 567
方案4 RNA的扩增 572
方案5 RNA的Cyanine-dUTP直接标记 578
方案6 RNA的氨基烯丙基-dUTP 间接标记 581
方案7 用Klenow酶对DNA进行Cyanine-dCTP标记 583
方案8 DNA的间接标记 585
方案9 封闭自制微阵列上的多聚赖氨酸 587
方案10 自制微阵列的杂交 589
第11章 DNA测序 595
导言 596
方案1 毛细管测序质粒亚克隆的制备 620
方案2 毛细管测序之PCR产物的制备 625
方案3 循环测序反应 627
方案4 全基因组：手工文库制备 630
方案5 全基因组：自动化的无索引文库制备 636
附加方案 自动化的文库制备 642
方案6 全基因组：自动化的带索引文库制备 644
方案7 用于Illumina测序的3kb末端配对文库的制备 651
方案8 用于Illumina测序的8kb末端配对文库的制备 659
附加方案 AMPure 磁珠校准 671
方案9 RNA-Seq:RNA反转录为cDNA及其扩增 673
附加方案 RNAClean XP磁珠纯化（RNA-Seq前） 679
方案10 液相外显子组捕获 680
附加方案 AMPure XP磁珠纯化 688
附加方案 琼脂糖凝胶大小筛选 689
方案11 自动化大小筛选 690
方案12 用SYBR Green-qPCR进行文库定量 693
方案13 用PicoGreen荧光法进行文库DNA定量 696
方案14 文库定量：用Qubit系统对双链或单链DNA进行荧光定量 700
方案15 为454 测序制备小片段文库 702
方案16 单链DNA文库的捕获及emPCR 708
方案17 Roche/454 测序：执行一个测序运行 714
方案18 结果有效性确认 721
方案19 测序数据的质量评估 723
方案20 数据分析 724
信息栏 725
下册
第12章 哺乳动物细胞中DNA甲基化分析 729
导言 730
方案1 DNA亚硫酸氢盐测序法检测单个核苷酸的甲基化 735
方案2 甲基化特异性聚合酶链反应法检测特定基因的DNA甲基化 742
方案3 基于甲基化胞嘧啶免疫沉淀技术的DNA甲基化分析 745
方案4 高通量深度测序法绘制哺乳动物细胞DNA甲基化图谱 749
方案5 亚硫酸氢盐转化的DNA文库的Roche 454克隆测序 760
方案6 亚硫酸氢盐转化的DNA文库的Illumina测序 765
信息栏 770
第13章 标记的DNA探针、RNA探针和寡核苷酸探针的制备 775
导言 776
方案1 随机引物法：用随机寡核苷酸延伸法标记纯化的DNA片段 792
方案2 随机引物法：在融化琼脂糖存在下用随机寡核苷酸延伸法标记DNA 798
方案3 用切口平移法标记DNA探针 800
方案4 用聚合酶链反应标记DNA探针 804
附加方案 不对称探针 808
方案5 体外转录合成单链RNA探针 809
附加方案 用PCR法将噬菌体编码的RNA聚合酶启动子加至DNA片段上 816
方案6 用随机寡核苷酸引物法从mRNA合成cDNA探针 818
方案7 用随机寡核苷酸延伸法制备放射性标记的消减cDNA探针 820
方案8 用大肠杆菌DNA聚合酶I的Klenow片段标记双链DNA的3′端 825
方案9 用碱性磷酸酶进行DNA片段的去磷酸化 831
方案10 含5′突出羟基端的DNA分子磷酸化 833
方案11 去磷酸化的平端或5′凹端DNA分子的磷酸化 836
方案12 用T4多核苷酸激酶进行寡核苷酸5′端的磷酸化 839
方案13 用末端脱氧核苷酸转移酶标记寡核苷酸3′端 841
替代方案 用TdT合成非放射性标记的探针 843
附加方案 加尾反应 843
附加方案 合成非放射性标记探针的修饰 844
方案14 用大肠杆菌DNA聚合酶I的Klenow片段标记合成的寡核苷酸 845
方案15 用乙醇沉淀法纯化标记的寡核苷酸 849
方案16 用空间排阻层析法纯化标记的寡核苷酸 850
方案17 用Sep-Pak C18柱色谱法纯化标记的寡核苷酸 852
方案18 寡核苷酸探针在水溶液中杂交： 在含季铵盐缓冲液中洗涤 854
信息栏 857
第14章 体外诱变方法 871
导言 872
方案1 用易错DNA聚合酶进行随机诱变 879
方案2 重叠延伸PCR产生插入或缺失诱变 890
方案3 以双链DNA为模板的体外诱变：用Dpn I选择突变体 897
方案4 突变型β-内酰胺酶选择法定点诱变 904
方案5 通过单一限制性位点消除进行寡核苷酸 指导的诱变（USE诱变） 910
方案6 利用密码子盒插入进行饱和诱变 915
方案7 随机扫描诱变 922
方案8 多位点定向诱变 926
方案9 基于PCR的大引物诱变 930
信息栏 933
第15章 向培养的哺乳动物细胞中导入基因 937
导言 938
方案1 阳离子脂质试剂介导的DNA转染 942
替代方案 采用DOTMA和DOGS进行转染 948
附加方案 单层细胞组织化学染色检测β-半乳糖苷酶 950
方案2 磷酸钙介导的质粒DNA转染真核细胞 952
替代方案 磷酸钙介导的质粒DNA高效转染真核细胞 956
方案3 磷酸钙介导的高分子质量基因组DNA转染细胞 959
替代方案 磷酸钙介导的贴壁细胞的转染 962
替代方案 磷酸钙介导的悬浮生长细胞的转染 963
方案4 DEAE-葡聚糖介导的转染：高效率的转染方法 964
替代方案 DEAE-葡聚糖介导的转染：提高细胞活力的方案 966
方案5 电穿孔转染DNA 968
方案6 通过alamarBlue法分析细胞活力 972
方案7 通过乳酸脱氢酶法分析细胞活力 974
方案8 通过MTT法分析细胞活力 977
信息栏 980
第16章 向哺乳动物细胞中导入基因：病毒载体 998
导言 999
方案1 直接克隆法构建重组腺病毒基因组 1019
方案2 将克隆的重组腺病毒基因组释放用于挽救和扩增 1023
方案3 氯化铯梯度沉降法纯化重组腺病毒 1028
方案4 限制性内切核酸酶消化法鉴定纯化后的重组腺病毒基因组 1031
方案5 TCID50终点稀释结合qPCR测定重组腺病毒感染滴度 1034
附加方案 准备qPCR的DNA标准品 1042
方案6 浓缩传代和Real-Time qPCR法检测有复制能力腺病毒（RCA） 1043
方案7 瞬时转染法制备rAAV 1051
方案8 氯化铯梯度沉降法纯化rAAV 1054
方案9 碘克沙醇梯度离心法纯化rAAV 1059
方案10 肝素亲和层析法纯化rAAV2 1062
方案11 阴离子交换柱层析法从碘克沙醇梯度离心后的rAAV 样本中富集完全包装病毒 1065
方案12 实时定量PCR 法测定rAAV基因组拷贝数 1068
方案13 TCID50终点稀释结合qPCR法灵敏测定rAAV感染滴度 1071
方案14 负染色法和高分辨电子显微镜分析rAAV样本形态 1074
方案15 银染SDS-PAGE分析rAAV纯度 1076
方案16 高滴度反转录病毒和慢病毒载体的制备 1079
方案17 慢病毒载体的滴定 1085
方案18 监测慢病毒载体储备液中的可复制型病毒 1089
信息栏 1091
第17章 利用报道基因系统分析基因表达调控 1102
导言 1103
方案1 哺乳动物细胞提取物中β-半乳糖苷酶的测定 1112
附加方案 化学发光实验检测β-半乳糖苷酶活性 1115
方案2 单萤光素酶报道基因实验 1118
方案3 双萤光素酶报道基因实验 1123
方案4 酶联免疫吸附试验定量检测绿色荧光蛋白 1128
方案5 用四环素调控基因表达建立细胞系 1131
附加方案 有限稀释法筛选悬浮细胞的稳定克隆 1138
信息栏 1140
第18章 RNA干扰与小RNA分析 1170
导言 1171
方案1 双链siRNA制备 1185
方案2 通过转染双链siRNA在哺乳动物细胞中进行RNA干扰 1187
方案3 通过转染双链siRNA在果蝇S2细胞中进行RNA干扰 1190
方案4 体外转录法制备dsRNA1192
方案5 采用dsRNA浸泡果蝇S2细胞进行RNA干扰 1196
方案6 采用dsRNA转染在果蝇S2细胞中进行RNA干扰 1198
方案7 小RNA的Northern杂交分析 1199
方案8 反转录定量PCR分析小RNA1203
方案9 构建小RNA高通量测序文库 1206
方案10 抑制miRNA功能的反义寡核苷酸制备 1215
方案11 在哺乳动物细胞中通过反义寡核苷酸抑制miRNA功能 1216
方案12 在果蝇S2细胞中通过反义寡核苷酸抑制miRNA功能 1218
信息栏 1219
第19章 克隆基因的表达以及目的蛋白的纯化和分析 1225
导言 1226
方案1 在大肠杆菌中利用可用IPTG诱导的启动子表达克隆化基因 1249
附加方案 目标蛋白可溶性表达的小量试验 1255
替代方案 在大肠杆菌中利用阿拉伯糖BAD启动子表达克隆基因 1260
替代方案 信号肽融合蛋白的亚细胞定位 1261
方案2 用杆状病毒表达系统表达克隆基因 1265
附加方案 噬菌斑测定法确定杆状病毒原液的滴度 1271
替代方案 用于转染昆虫细胞的杆粒DNA制备 1274
方案3 用甲醇诱导启动子AOX1在毕赤酵母中表达克隆基因 1277
附加方案 酵母培养物的冻存 1287
方案4 用于纯化大肠杆菌中表达可溶性蛋白的细胞提取物的制备 1291
附加方案 酵母细胞玻璃珠裂解法 1296
替代方案 温和的热诱导的酶裂解法制备大肠杆菌细胞提取物 1298
替代方案 用溶菌酶裂解和冻融法联用制备大肠杆菌细胞提取物 1300
方案5 采用固化的金属亲和层析纯化多聚组氨酸标记的蛋白质 1302
附加方案 Ni2+-NTA树脂的清洗与再生 1309
替代方案 组氨酸标签蛋白的快速液相色谱纯化 1310
方案6 采用谷胱甘肽树脂以亲和层析纯化融合蛋白 1314
方案7 包含体中表达蛋白的增溶 1321
方案8 蛋白质的SDS-PAGE 1325
替代方案 用考马斯亮蓝进行SDS-PAGE凝胶染色的各种不同方法 1335
替代方案 用银盐进行SDS-PAGE凝胶染色 1336
方案9 蛋白质的免疫印迹分析 1340
方案10 测定蛋白质浓度的方法 1347
信息栏 1353
第20章 利用交联技术分析染色质结构与功能 1358
导言 1359
方案1 甲醛交联 1369
方案2 制备用于染色质免疫沉淀的交联染色质 1371
方案3 染色质免疫沉淀（ChIP） 1373
方案4 染色质免疫沉淀-定量聚合酶链反应（ChIP-qPCR） 1377
方案5 染色质免疫沉淀-芯片杂交（ChIP-chip） 1378
方案6 染色质免疫沉淀-高通量测序（ChIP-seq） 1385
方案7 交联细胞3C 文库的制备 1389
方案8 环形染色质免疫沉淀（ChIP-loop）文库的制备 1393
方案9 连接产物对照组文库的制备 1398
方案10 PCR 检测3C、ChIP-loop和对照文库中的3C连接产物：文库滴定与相互作用频率分析 1400
方案11 3C、ChIP-loop和对照组文库的4C分析 1404
方案12 3C、ChIP-loop和对照组文库的5C分析 1408
信息栏 1412
第21章 紫外交联免疫沉淀（CLIP）技术进行体内RNA结合位点作图 1415
导言 1416
方案1 CLIP 实验免疫沉淀严谨性的优化 1424
方案2 活细胞的紫外交联和裂解物制备 1429
方案3 RNA酶滴定、免疫沉淀及SDS-PAGE 1432
方案4 3'-接头的连接和用SDS-PAGE进行大小选择 1441
替代方案 去磷酸化RL3接头5'端的标记 1445
方案5 RNA标签的分离、5'-接头的连接和反转录PCR扩增 1446
方案6 RNACLIP标签测序 1456
方案7 RNA接头胶回收及保存 1458
信息栏 1460
第22章 Gateway相容酵母单杂交和双杂交系统 1464
导言 1465
方案1 构建酵母单杂交DNA-诱饵菌株 1474
替代方案 用复性引物从DNA诱饵中获得入门克隆产物 1481
方案2 生成酵母双杂交DB-诱饵菌株 1484
方案3 从活化域捕获文库中鉴定相互作用分子 1490
方案4 高效的酵母转化 1496
方案5 用于β-半乳糖苷酶活力的菌落转移比色测定 1500
方案6 酵母克隆的PCR 1502
信息栏 1504
附录1 试剂和缓冲液 1507
附录2 常用技术 1533
附录3 检测系统 1541
附录4 一般安全原则和危险材料 1565
索引 1573译者序
原著序
第1章认清你要什么
人人向往的实验室
从合适的地方开始
设计你中意的实验室
阅读资料
第2章你是领导者
除了如何运作个实验室，其他的我都受过训练了
不要发火!!!
用好你的时间
与秘书／管理助理起工作
不让自己孤立
阅读资料
第3章选择实验室成员
选择实验室成员
雇人的程序
高效率的面试
对候选者正确评估
阅读资料
第4章实验室新成员
良好的开端
成员培训
如何选择学生
阅读资料
第5章以研究为本
确定航向
实验室的维持
写论文
阅读资料
第6章支撑研究的实验室建设
创建实验室文化
实验室守则
实验室会议和学术讨论会
用电脑让实验室更有条理
阅读资料
第7章密切沟通
与你实验室的交流
多样性的快乐和危险
性别仍然是个问题
在冲突中学习
实验室成员的压力和消沉
阅读资料
第8章和群体相处
实验室士气
实验室里的恋情
保持人员的平衡
“我本应该早点这么做”
实验室暴力
阅读资料
第9章路漫漫，其修远兮
当你的工作发生变化时
保持激情
职业选择
做完整的人
阅读资料前言
1 实验室电、气、化学试剂的安全使用
1.1 用电安全
1.1.1 防触电和防静电
1.1.2 电起火及其防止
1.1.3 实验室常用电器设备的安全使用
1.2 化学试剂的安全使用及管理
1.2.1 化学试剂的安全储存及使用
1.2.2 常用化学试剂的危害及预防
1.3 蒸汽、压缩气、液化气的安全使用
1.3.1 高压蒸汽灭菌器及其安全使用
1.3.2 高压气瓶及其安全使用
1.4 实验室常用玻璃器皿的安全使用
1.4.1 玻璃器皿的安全使用
1.4.2 玻璃器皿的清洗
1.5 化学三废的处理
1.5.1 废液
1.5.2 废气
1.5.3 废物
1.6 实验室意外事故防护及急救
1.6.1 火灾
1.6.2 中毒
1.6.3 爆炸
1.6.4 外伤
主要参考文献
2 微生物实验室生物安全与管理
2.1 实验室生物安全与管理概论
2.1.1 实验室生物安全
2.1.2 国外有关实验室生物安全规定
2.1.3 我国实验室生物安全法规
2.2 微生物的危害等级及生物安全水平
2.2.1 微生物的危害等级
2.2.2 生物安全水平
2.3 实验室生物安全防护
2.3.1 实验室生物安全防护基本内容
2.3.2 生物安全实验室（BSL1-4）安全操作规程
2.3.3 实验室生物安全设备和仪器的使用
2.3.4 个体防护装备和措施
2.4 实验室污染及其防护
2.4.1 病毒污染的防护
2.4.2 细胞污染的防护
2.4.3 操作者间交互污染的防护
2.4.4 细胞及毒种之间交互污染的防护
2.4.5 洗手池和门把手
2.4.6 最常见的办公室污染源
2.5 实验室意外事故应急程序
2.5.1 意外事故应对方案操作规范
2.5.2 制定意外事故应对方案时应考虑的问题
2.5.3 微生物实验室应急程序
2.6 微生物实验管理
2.6.1 实验室财产管理制度
2.6.2 仪器设备管理
2.6.3 准入规定
2.6.4 生物安全管理
2.6.5 BSL-3实验室规章制度
主要参考文献
附录2-1 《病原微生物实验室生物安全管理条例》
附录2-2 《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》WS233-2002
3 基因工程实验室的安全与管理
3.1 基因工程实验室安全概述
3.2 基因工程实验室防护原理
3.2.1 基因工程实验室防护的基本原则
3.2.2 控制
3.2.3 屏障
3.3 基因工程实验室操作的安全防护设施
3.3.1 实验室通风橱
3.3.2 生物安全橱
3.3.3 实验人员保护物品
3.4 基因工程实验危险因素及其防护
3.4.1 致癌物及其实验室安全守则
3.4.2 基因工程实验常用的有害化学试剂及其防护
3.4.3 基因工程实验仪器的安全使用
3.4.4 基因工程实验的生物危害及其防护
3.4.5 生物危害废品的处理
3.4.6 实验动物的危害及其安全管理
主要参考文献
附录3-1 基因工程安全管理办法
附录3-2 农业转基因生物安全管理条例
4 放射性同位素实验室的安全与管理
4.1 放射性同位素的基本知识
4.1.1 放射性现象的发现
4.1.2 放射性同位素及相关概念
4.1.3 放射性同位素的特点
4.1.4 常用同位素性质
4.1.5 电离辐射
4.2 电离辐射的危害及其危害机制
4.2.1 电离辐射的危害
4.2.2 电离辐射对人体损伤的机制
4.2.3 电离辐射的生物效应的影响因素
4.3 电离辐射防护
4.3.1 电离辐射防护原则
4.3.2 电离辐射防护性措施
4.3.3 电离辐射监测技术
4.3.4 现代生物技术实验中常用同位素及检测方法
4.4 电离放射防护的操作规程
4.4.1 辐射区域
4.4.2 实验区域
4.4.3 放射性废弃物区域
4.5 放射性同位素实验室安全操作的一般步骤
4.6 放射性同位素开瓶取液安全操作技术
4.7 同位素实验室个体防护措施
4.7.1 控制外照射的防护措施
4.7.2 内照射的防护措施
4.8 实验室去污和放射性污物处理
4.8.1 实验室去污
4.8.2 放射性污染物的处理
4.9 非电离辐射的危险及防护
4.10 放射性同位素实验室的管理
4.10.1 放射性同位素实验室的管理内容
4.10.2 放射性实验室安全管理制度
4.10.3 电离辐射防护的管理规程
主要参考文献
附录4-1 《放射性同位素与射线装置安全和防护条例》目录
上册
第1章 DNA的分离及定量 1
导言 2
方案1 SDS碱裂解法制备质粒DNA：少量制备 9
方案2 SDS碱裂解法制备质粒DNA：大量制备 12
方案3 从革兰氏阴性菌（如Ecolz中分离DNA 15
方案4 乙醇法沉淀DNA 17
方案5 异丙醇法沉淀DNA 21
方案6 用微量浓缩机进行核酸的浓缩和脱盐 22
方案7 丁醇抽提法浓缩核酸 23
方案8 聚乙二醇沉淀法制备Ml3噬菌体单链DNA 24
方案9 Ml3噬菌体铺平板 27
方案10 Ml3噬菌体液体培养 30
方案11 Ml3噬菌体双链（复制型）DNA的制备 32
方案12 利用有机溶剂分离纯化高分子质量DNA 35
方案13 用蛋白酶K和苯酚从哺乳动物细胞中分离高分子质量DNA 37
方案14 一步法同时提取细胞或组织中的DNA、RNA和蛋白质 43
方案15 从鼠尾或其他小样本中制备基因组DNA 46
替代方案：不使用有机溶剂从鼠尾分离DNA 48
替代方案：一管法从鼠尾中分离DNA 49
方案16 快速分离酵母DNA 50
方案17 微型凝胶电泳后使用溴化乙锭(EB)估算条带中DNA数量 52
方案18 利用Hoechst33258通过荧光分析仪估算DNA浓度 53
方案19 用PicoGreen定量溶液中的DNA 55
信息栏 56
第2章 DNA分析 62
导言 63
方案1 琼脂糖凝胶电泳 73
方案2 琼脂糖凝胶中DNA的染色检测 76
方案3 聚丙烯酰胺凝胶电泳 80
方案4 聚丙烯酰胺凝胶中DNA的染色检测 85
方案5 聚丙烯酰胺凝胶中DNA的放射自显影检测 86
方案6 碱性琼脂糖凝胶电泳 87
附加方案：碱性琼脂糖凝胶的放射自显影 90
方案7 成像：放射自显影和感光成像 91
方案8 用玻璃珠从琼脂糖凝胶中回收DNA 96
方案9 低熔点琼脂糖凝胶中DNA的回收：有机溶剂抽提法 98
方案10 聚丙烯酰胺凝胶中DNA片段的回收：压碎与浸泡法 101
方案11 Southern印迹 103
方案12 Southern印迹：DNA从一块琼脂糖凝胶同时向两张膜转移 110
方案13 采用放射性标记探针对固定在膜上的核酸DNA进行Southern杂交 112
附加方案：从膜上洗脱探针 117
信息栏 119
第3章 质粒载体克隆与转化 122
导言 123
方案1 制备和转化感受态大肠杆菌的Hanahan方法：高效转化策略 126
方案2 制备和转化感受态大肠杆菌的Inoue方法：“超级感受态”细胞 131
方案3 大肠杆菌的简单转化：纳米颗粒介导的转化 135
替代方案：一步法制备感受态大肠杆菌：在同一溶液中转化和储存细菌细胞 136
方案4 电穿7L法转化大肠杆菌 138
方案5 质粒载体克隆：定向克隆 143
方案6 质粒载体克隆：平末端克隆 145
方案7 质粒DNA的去磷酸化 148
方案8 向平末端DNA添加磷酸化衔接子／接头 150
方案9 克隆PCR产物：向扩增DNA的末端添加限制性酶切位点 151
方案10 克隆PCR产物：平末端克隆 154
方案11 克隆PCR产物：制各T载体 157
方案12 克隆PCR产物：TA克隆 159
方案13 克隆PCR产物：TOPO TA克隆 161
方案14 使用X-Gal和IPTG筛选细菌菌落：a-互补 165
信息栏 167
第4章 Gateway重组克隆 205
导言 206
方案1 扩增Gatewav载体 210
方案2 制备可读框入门克隆和目的克隆 213
方案3 应用多位点LR克隆反应制备目的克隆 219
信息栏 222
第5章 细菌人工染色体及其他高容量载体的应用 223
导言 224
方案1 BAC DNA的小量分离和PCR检验 235
方案2 BAC DNA的大量制备和线性化 238
方案3 通过脉冲电场凝胶电泳检验BAC DNA的质量和数量 241
方案4 两步BAC工程：穿梭载体DNA的制备 242
方案5 A同源臂(A-Box)和B同源臂(B-Box)的制备 244
方案6 克隆A和B同源臂到穿梭载体 247
方案7 重组穿梭载体的制备和检验 249
方案8 通过电穿7L法转化重组穿梭载体到感受态BAC宿主细胞 251
方案9 共合体的检验和重组BAC克隆的筛选 253
方案10 一步BAC修饰：质粒制备 256
方案11 A同源臂(A-Box)的制备 259
方案12 克隆A同源臂到报道穿梭载体 260
方案13 用RecA载体转化BAC宿主 263
方案14 转移报道载体到BACiRecA细胞以及共合体的筛选 265
方案15 酿酒酵母(S.cerevisiae)的生长和DNA制备 267
方案16 酵母DNA的小量制备 269
信息栏 270
第6章 真核细胞RNA的提取、纯化和分析 275
导言 276
方案1 从哺乳动物的细胞和组织中提取总RNA 279
替代方案 从小量样本提取RNA 281
方案2 从斑马鱼胚胎和成体中提取总RNA 282
方案3 从黑腹果蝇提取总RNA 283
方案4 从秀丽隐杆线虫中提取总RNA 285
方案5 从酿酒酵母菌中采用热酸酚提取总RNA 287
方案6 RNA定量和储存 289
方案7 RNA的乙醇沉淀 295
方案8 通过无RNase的DNaseI处理去除RNA样品中的DNA污染 297
方案9 oligo(dT)磁珠法提取poly(A)+mRNA 298
方案10 按照大小分离RNA：含甲醛的琼脂糖凝胶电泳 308
方案11 根据分子质量大小分离RNA: RNA的尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 312
方案12 琼脂糖凝胶中变性RNA的辖膜和固定 319
替代方案 下行毛细管转移 323
方案13 聚丙烯酰胺凝胶的电转移和膜固定 325
方案14 Northern杂交 327
方案15 纯化RNA的点杂交和狭缝杂交 330
方案16 用核酸酶Sl对RNA作图 342
方案17 核糖核酸酶保护分析：用核糖核酸酶和放射性标记的RNA探针对RNA作图 349
方案18 引物延伸法分析RNA 355
信息栏 359
第7章 聚合酶链反应 363
导言 364
方案1 基础PCR 375
方案2 热启动PCR 380
方案3 降落PCR 383
方案4 高GC含量模板的PCR扩增 385
方案5 长片段高保真PCR (IA PCR) 390
方案6 反向PCR 393
方案7 巢式PCR 397
方案8 mRNA反转录产物cDNA的扩增：两步法RT-PCR 400
方案9 由mRNA的5'端进行序列的快速扩增：5'-RACE 409
方案10 由mRNA的3'端进行序列的快速扩增：3 '-RACE 416
方案11 使用PCR筛选克隆 422
信息栏 424
第8章 生物信息学 431
导言 432
方案1 使用ucsc基因组浏览器将基因组注释可视化 434
方案2 使用BLAST和ClustalW进行序列比对和同源性检索 444
方案3 使用Primer3Plus设计PCR引物 450
方案4 使用微阵列和RNA-seq进行表达序列谱分析 461
方案5 将上亿短读段定位至参考基因组上 472
方案6 识别ChIP-seq数据集中富集的区域（寻峰） 483
方案7 发现顺式调控基序 495
信息栏 503
中册
第9章 实时荧光聚合酶链反应定量检测DNA及RNA 509
导言 510
方案1 实时PCR反应用引物和探针浓度的优化 532
方案2 制作标准曲线 537
方案3 实时荧光PCR定量检测DNA 540
方案4 实时荧光PCR定量检测RNA 542
方案5 实时荧光PCR实验数据的分析和归一化 545
信息栏 550
第10章 核酸平台技术 551
导言 552
方案1 即制微阵列 560
方案2 Round AiRoundB DNA扩增 564
方案3 核小体DNA和其他小于500bp的DNA的T7线性扩增(TIAD) 567
方案4 RNA的扩增 572
方案5 RNA的Cvanine-dUTP直接标记 578
方案6 RNA的氨基烯丙基-dUTP间接标记 581
方案7 用Klenow酶对DNA进行Cyanine-dCTP标记 583
方案8 DNA的间接标记 585
方案9 封闭自制微阵列上的多聚赖氨酸 587
方案10 自制微阵列的杂交 589
第11章 DNA测序 595
导言 596
方案1 毛细管测序质粒亚克隆的制备 620
方案2 毛细管测序之PCR产物的制备 625
方案3 循环测序反应 627
方案4 全基因组：手工文库制备 630
方案5 全基因组：自动化的无索引文库制备 636
附加方案 自动化的文库制备 642
方案6 全基因组：自动化的带索引文库制备 644
方案7 用于Illumina测序的3kb末端配对文库的制备 651
方案8 用于Illumina测序的8kb末端配对文库的制备 659
附加方案 AMPure磁珠校准 671
方案9 RNA—Seq:RNA反转录为cDNA及其扩增 673
附加方案 RNACleanⅪ’磁珠纯化/RNA—Seq前） 679
方案10 液相外显子组捕获 680
附加方案 AMPure XP磁珠纯化 688
附加方案 琼脂糖凝胶大小筛选 689
方案11 自动化大小筛选 690
方案12 用SYBR Green-qPCR进行文库定量 693
方案13 用PicoGreen荧光法进行文库DNA定量 696
方案14 文库定量：用Qubit系统对双链或单链DNA进行荧光定量 700
方案15 为454测序制备小片段文库 702
方案16 单链DNA文库的捕获及emPCR 708
方案17 Rochei454测序：执行一个测序运行 714
方案18 结果有效性确认 721
方案19 测序数据的履量评估 723
方案20 数据分析 724
信息栏 725
第12章 哺乳动物细胞中DNA甲基化分析 729
导言 730
方案1 DNA亚硫酸氢盐测序法检测单个核苷酸的甲基化 735
方案2 甲基化特异性聚合酶链反应法检测特定基因的DNA甲基化 742
方案3 基于甲基化胞嘧啶免疫沉淀技术的DNA甲基化分析 745
方案4 高通量深度测序法绘制哺乳动物细胞DNA甲基化图谱 749
方案5 亚硫酸氢盐转化的DNA文库的Roche454克隆测序 760
方案6 亚硫酸氢盐转化的DNA文库的Illumina测序 765
信息栏 770
第13章 标记的DNA探针、RNA探针和寡核苷酸探针的制备 775
导言 776
方案1 随机引物法：用随机寡核苷酸延伸法标记纯化的DNA片段 792
方案2 随机引物法：在融化琼脂糖存在下用随机寡核苷酸延伸法标记DNA 798
方案3 用切口平移法标记DNA探针 800
方案4 用聚合酶链反应标记DNA探针 804
附加方案 不对称探针 808
方案5 体外转录合成单链RNA探针 809
附加方案 用PCR法将噬菌体编码的RNA聚合酶启动子加至DNA片段上 816
方案6 用随机寡核苷酸引物法从mRNA合成cDNA探针 818
方案7 用随机寡核苷酸延伸法制备放射性标记的消减cDNA探针 820
方案8 用大肠杆菌DNA聚合酶I的Klenow片段标记双链DNA的3' 端 825
方案9 用碱性磷酸酶进行DNA片段的去磷酸化 831
方案10 含5'突出羟基端的DNA分子磷酸化 833
方案11 去磷酸化的平端或5'凹端DNA分子的磷酸化 836
方案12 用T4多核苷酸激酶进行寡核苷酸5'端的磷酸化 839
方案13 用末端脱氧核苷酸转移酶标记寡核苷酸3'端 841
替代方案 用TdT合成非放射性标记的探针 843
附加方案 加尾反应 843
附加方案 合成非放射性标记探针的修饰 844
方案14 用大肠杆菌DNA聚合酶I的Klenow片段标记合成的寡核苷酸 845
方案15 用乙醇沉淀法纯化标记的寡核苷酸 849
方案16 用空间排阻层析法纯化标记的寡核苷酸 850
方案17 用Sep-PakCl8柱色谱法纯化标记的寡核苷酸 852
方案18 寡核苷酸探针在水溶液中杂交： 在含季铵盐缓冲液中洗涤 854
信息栏 857
第14章 体外诱变方法 871
寻言 872
方案1 用易错DNA聚合酶进行随机诱变 879
方案2 重叠延伸PCR产生插入或缺失诱变 890
方案3 以双链DNA为模板的体外诱变：用DpnI选择突变体 897
方案4 突变型B一内酰胺酶选择法定点诱变 904
方案5 通过单一限制性位点消除进行寡核苷酸指导的诱变/USE诱变） 910
方案6 利用密码子盒插入进行饱和诱变 915
方案7 随机扫描诱变 922
方案8 多位点定向诱变 926
方案9 基于PCR的大引物诱变 930
信息栏 933
第15章 向培养的哺乳动物细胞中导入基因 937
导言 938
方案1 阳离子脂质试剂介导的DNA转染 942
替代方案 采用DOTMA和DOGS进行转染 948
附加方案 单层细胞组织化学染色检测B一半乳糖苷酶 950
方案2 磷酸钙介导的质粒DNA转染真核细胞 952
替代方案 磷酸钙介导的质粒DNA高效转染真核细胞 956
方案3 磷酸钙介导的高分子质量基因组DNA转染细胞 959
替代方案 磷酸钙介导的贴壁细胞的转染 962
替代方案 磷酸钙介导的悬浮生长细胞的转染 963
方案4 DEAE-葡聚糖介导的转染：高效率的转染方法 964
替代方案 DEAE-葡聚糖介导的转染：提高细胞活力的方案 966
方案5 电穿孑L转染DNA 968
方案6 通过alamarBlue法分析细胞活力 972
方案7 通过乳酸脱氢酶法分析细胞活力 974
方案8 通过MTT法分析细胞活力 977
信息栏 980
第16章 向哺乳动物细胞中导入基因：病毒载体 998
导言 999
方案1 直接克隆法构建重组腺病毒基因组 1 019
方案2 将克隆的重组腺病毒基因组释放用于挽救和扩增 1023
方案3 氯化铯梯度沉降法纯化重组腺病毒 1028
方案4 限制性内切核酸酶消化法鉴定纯化后的重组腺病毒基因组 1031
方案5 TCID50终点稀释结合qPCR测定重组腺病毒感染滴度 1034
附加方案 准备qPCR的DNA标准品 1042
方案6 浓缩传代和Real-Time qPCR法检测有复制能力腺病毒(RCA) 1043
方案7 瞬时转染法制备rAAV 1051
方案8 氯化铯梯度沉降法纯化rAAV 1054
方案9 碘克沙醇梯度离心法纯化rAAV 1059
方案10 肝素亲和层析法纯化rAAV2 1062
方案11 阴离子交换柱层析法从碘克沙醇梯度离心后的rAAV样本中富集完全包装病毒 1065
方案12 实时定量PCR法测定rAAV基因组拷贝数 1068
方案13 TCID50终点稀释结合qPCR法灵敏测定rAAV惑染滴度 1071
方案14 负染色法和高分辨电子显微镜分析rAAV样本形态 1074
方案15 银染SDS-PAGE分析rAAV纯度 1076
方案16 高滴度反转录病毒和慢病毒载体的制备 1079
方案17 慢病毒载体的滴定 1085
方案18 监测慢病毒载体储备液中的可复制型病毒 1089
信息栏 1091
下册
第17章 利用报道基因系统分析基因表达调控 1102
导言 1103
方案1 哺乳动物细胞提取物中B一半乳糖苷酶的测定 1112
附加方案 化学发光实验检测B一半乳糖苷酶活性 1115
方案2 单萤光素酶报道基因实验 1118
方案3 双萤光素酶报道基因实验 1123
方案4 酶联免疫吸附试验定量检测绿色荧光蛋白 1128
方案5 用四环素调控基因表达建立细胞系 1131
附加方案 有限稀释法筛选悬浮细胞的稳定克隆 1138
信息栏 1140
第18章 RNA干扰与小RNA分析 1170
导言 1171
方案1 双链siRNA制备 1185
方案2 通过转染双链siRNA在哺乳动物细胞中进行RNA干扰 1187
方案3 通过转染双链siRNA在果蝇S2细胞中进行RNA干扰 1190
方案4 体外转录法制备dsRNA 1192
方案5 采用dsRNA浸泡果蝇S2细胞进行RNA干扰 1196
方案6 采用dsRNA转染在果蝇S2细胞中进行RNA干扰 1198
方案7 小RNA的Northern杂交分析 1199
方案8 反转录定量PCR分析小RNA 1203
方案9 构建小RNA高通量测序文库 1206
方案10 抑制miRNA功能的反义寡核苷酸制备 1215
方案11 在哺乳动物细胞中通过反义寡核苷酸抑制miRNA功能 1216
方案12 在果蝇S2细胞中通过反义寡核苷酸抑制miRNA功能 1218
信息栏 1219
第19章 克隆基因的表达以及目的蛋白的纯化和分析 1225
导言 1226
方案1 在大肠杆菌中利用可用IPTG诱导的启动子表达克隆化基因 1249
附加方案 目标蛋白可溶性表达的小量试验 1255
替代方案 在大肠杆菌中利用阿拉伯糖BAD启动子表达克隆基因 1260
替代方案 信号肽融合虽白的亚细胞定位 1261
方案2 用杆状病毒表达系统表达克隆基因 1265
附加方案 噬菌斑测定法确定杆状病毒原液的滴度 1271
替代方案 用于转染昆虫细胞的杆粒DNA制备 1274
方案3用 甲醇诱导启动子AOX1在毕赤酵母中表达克隆基因 1277
附加方案 酵母培养物的冻存 1287
方案4 用于纯化大肠杆菌中表达可溶性蛋白的细胞提取物的制备 1291
附加方案 酵母细胞玻璃珠裂解法 1296
替代方案 温和的热诱导的酶裂解法制备大肠杆菌细胞提取物 1298
替代方案 用溶菌酶裂解和冻融法联用制备大肠杆菌细胞提取物 1300
方案5 采用固化的金属亲和层析纯化多聚组氨酸标记的蛋白质 1302
附加方案 Niz+-NTA树脂的清洗与再生 1309
替代方案 组氨酸标签蛋白的快速液相色谱纯化 1310
方案6 采用谷胱甘肽树脂以亲和层析纯化融合蛋白 1314
方案7 包含体中表达蛋白的增溶 1321
方案8 蛋白质的SDS-PAGE 1325
替代方案 用考马斯亮蓝进行SDS-PAGE凝胶染色的各种不同方法 1335
替代方案 用银盐进行SDS-PAGE凝胶染色 1336
方案9 蛋白质的免疫印迹分析 1340
方案 10测定蛋白质浓度的方法 1347
信息栏 1353
第20章 利用交联技术分析染色质结构与功能 1358
导言 1359
方案1 甲醛交联 1369
方案2 制备用于染色质免疫沉淀的交联染色质 1371
方案3 染色质免疫沉淀(ChIP) 1373
方案4 染色质免疫沉淀-定量聚合酶链反应( ChIP-qPCR) 1377
方案5 染色质免疫沉淀-芯片杂交（ChIP-chip） 1378
方案6 染色质免疫沉淀-高通量测序(ChIP-seq) 1385
方案7 交联细胞3C文库的制备 1389
方案8 环形染色质免疫沉淀（ChIP-loop）文库的制备 1393
方案9 连接产物对照组文库的制备 1398
方案10 PCR检测3C、ChIP-loop和对照文库中的3C连接产物：文库滴定与相互作用频率分析 1400
方案11 3C、ChIP-loop和对照组文库的4C分析 1404
方案12 3C、ChIP-loop和对照组文库的5C分析 1408
信息栏 1412
第21章 紫外交联免疫沉淀(CLIP)技术进行体内RNA结合位点作图 1415
导言 1416
方案1 CLIP实验免疫沉淀严谨性的优化 1424
方案2 活细胞的紫外交联和裂解物制备 1429
方案3 RNA酶滴定、免疫沉淀及SDS-PAGE 1432
方案4 3'-接头的连接祁用SDS-PAGE进行大小选择 1441
替代方案 去磷酸化RL3接头5端的标记 1445
方案5 RNA标签的分离、5二接头的连接和反转录PCR扩增 1446
方案6 RNA CLIP标签测序 1456
方案7 RNA接头胶回收及保存 1458
信息栏 1460
第22章 Gateway相容酵母单杂交和双杂交系统 1464
导言 1465
方案1 构建酵母单杂交DNA-诱饵菌株 1474
替代方案 用复性引物从DNA诱饵中获得入门克隆产物 1481
方案2 生成酵母双杂交DB-诱饵菌株 1484
方案3 从活化域捕获文库中鉴定相互作用分子 1490
方案4 高效的酵母转化 1496
方案5 用于B-半乳糖苷酶活力的菌落转移比色测定 1500
方案6 酵母克隆的PCR 1502
信息栏 1504
附录1 试剂和缓冲液 1507
附录2 常用技术 1533
附录3 检测系统 1541
附录4 一般安全原则和危险材料 1565
索引 1573
译者序
前言
各章附加的影像
上篇 活细胞成像的检测和方法
第1章 荧光蛋白的跟踪与检测
第2章 荧光蛋白融合的构建和表达
第3章 用线性聚丙烯酸阻抗细胞与基底黏附的微图案化处理技术
第4章 CCD相机在活细胞荧光成像中的应用
第5章 荧光干扰技术研究活细胞中蛋白质的运动性和分子动态:FRAP、Photoacivation、Photoconversin和FLIP
第6章 细胞中蛋白质状态成像
第7章 用于高分辨率活细胞成像的多功能多色彩全内反射荧光及转盘式共聚焦显微成像系统
第8章 共聚焦显微镜、去卷积和结构照明方法
第9章 生物成像和微观机械性质测量中的原子力显微镜
第10章 OMX,一个多模式多通道宽场成像的新平台
第11章 数字扫描激光光片荧光显微镜
第12章 活体细胞荧光相关光谱初步
第13章 动态移动细胞和粒点的跟踪及定量分析
第14章 测量细胞材料特性的成像技术
第15章 细胞动态的计算图像分析——粒点追踪的案例分析
第16章 显微成像中的软件工具、数据结构及控制界面
第17章 以哺乳动物活细胞为例介绍高通量显微镜
下篇 活细胞和生物体的成像
第18章 哺乳动物细胞的活体成像
第19章 酵母活细胞成像
第20章 线虫的活细胞成像
第21章 植物活细胞成像
第22章 果蝇活细胞成像技术的拓展
第23章 乳腺癌鼠模型肿瘤基质相互作用在转盘式共聚焦显微镜下的动态和长时间活体成像
第24章 活体肿瘤的高分辨多光子成像
第25章 四半胱氨酸标签与双砷染料标记的活细胞光学显微镜与电子显微镜的关联成像
第26章 小鼠正常组织和疾病组织活体成像研究
第27章 活细胞中脂类的成像
第28章 染色体被乳糖操纵基因标记的哺乳动物细胞系的发展
第29章 活细胞中基因表达的成像
第30章 在哺乳动物培养细胞中研究有丝分裂
第31章 中间纤维蛋白在活细胞内的成像
第32章 表达和分析绿色荧光蛋白标记的微管蛋白和微管相关蛋白的方法
第33章 膜系统和膜运输的活细胞成像
第34章 机械应力下的活细胞成像
第35章 基于全内反射荧光显微镜的单分子成像
第36章 基于全内反射荧光显微技术的细胞成像
第37章 活细胞中单个RNA分子的观测与定量分析
附录 注意事项
索引
译者名单
译者序
前言
编写人员
第1章 基因定位
单元1.1 连锁研究所需临床和流行病学资料的收集
单元1.2 家系选择和信息含量
单元1.3 单精子分型
单元1.4 采用LINKAGE软件包进行连锁分析
单元1.5 非模式依赖的遗传连锁检验
单元1.6 利用DNA池技术进行纯合子定位
单元1.7 疾病关联和基于家系的检验
单元1.8 基因唱基因相互作用的分析
第2章 基因分型
单元2.1 基于PCR的基因分型方法
单元2.2 基于连接分析的分型方法
单元2.3 自动荧光的分型方法
单元2.4 用微阵列的方法分型单核苷酸多态
单元2.5 使用TAQMAN分析法的高通量基因分型
单元2.6 使用引物延伸荧光偏振探测法的高通量基因分型
第3章 体细胞杂交简介
单元3.1 体细胞杂交的构建
第4章 细胞遗传学
单元4.1 经培养外周血细胞的染色体制备
单元4.2 小鼠细胞染色体制备及核型分析
单元4.3 染色体显带技术
单元4.4 中期染色体和间期核的原位杂交
单元4.5 高分辨率FISH分析
单元4.6 多色荧光原位杂交（FISH）方法分析人类完全基因组
单元4.7 应用形态学抗体染色体技术确定细胞的表型与基因型
单元4.8 比较基因组杂交
第5章 大片段的克隆和分析
单元5.1 大范围限制性图谱：脉冲电场电泳
单元5.2 用杂交的方法筛选大片段插入的文库
单元5.3 胚胎将大片段插入DNA导入哺乳动物细胞和胚胎
单元5.4 BAC／PAC文库的构建
第6章 确定基因组DNA候选基因
单元6.1 基因鉴定：方法和注意事项
单元6.2 序列数据库：整体信息的检索和数据的提交
单元6.3 使用BLAST程序家族查找序列相似性
单元6.4 人类基因组的获取
单元6.5 使用Entrez来检索NCBI数据库
第7章 搜寻候选基因突变的方法
单元7.1 患病个体的序列扩增
单元7.2 通过单链构象多态性分析检测基因突变
单元7.3 毛细管电泳法分析单链构象多态性
单元7.4 应用基于荧光的自动化测序进行杂合体检测
单元7.5 用循环测序法检测突变
单元7.6 人类突变数据库
第8章 临床细胞遗传学
单元8.1 绒毛标本分裂中期染色体涂片制备
单元8.2 羊水标本的制备、培养和分析
单元8.3 用于染色体分析的妊娠产物及其他固体组织来源样本的培养及制备
单元8.4 姐妹染色单体互换（SCE）分析
单元8.5 利用石蜡包埋组织鉴定染色体非整倍体
单元8.6 羊水细胞用于间期核FISH分析的制备方法
单元8.7 范可尼贫血（先天性骨髓发育不全）的诊断——二氧桥丁烷（双环氧丁烷）检测
第9章 临床分子遗传学
单元9.1 运用多重PCR检测营养不良基因缺失
单元9.2 利用等位基因特异性寡聚核苷酸（Allelespecificoligonucleotide,ASO）同时检测多点突变
单元9.3 脆性X综合征的分子分析
单元9.4 肌强直性肌营养不良（myotonicdystrophin,DM）的三核苷酸重复的分析
单元9.5 非随机X染色体失活的检测
单元9.6 父子关系的分子分析
单元9.7 点突变不易扩增突变系统（简称ARMS）分析
单元9.8 线粒体DNA突变缺失氧化磷酸化疾病的分子分析
单元9.9 单细胞DNA和FISH分析应用于植入前基因诊断
单元9.10 蛋白质截短试验
单元9.11 载脂蛋白E（apolipoproteinE,APOE）基因型分析：不同方法间比较
第10章 癌基因组学
单元10.1 收获分裂中期的细胞对恶性肿瘤患者的血液标本进行细胞遗传学分析
单元10.2 实体瘤培养分裂中期细胞的收获和细胞遗传学分析
单元10.3 分子生物学方法分析白血病和非霍奇金氏淋巴瘤的DNA重组
单元10.4 肿瘤中基因扩增的分子分析
单元10.5 甲基化特异性PCR
第11章 转录谱
单元11.1 用于表达监测的寡核苷酸分析
单元11.2 用cDNA芯片分析人类基因表达
单元11.3 表达数据分析概述
第12章 基因治疗载体
单元12.1 基因转移载体的生物安全性问题
单元12.2 腺病毒载体
单元12.3 重组腺相关病毒载体的生产
单元12.4 反转录病毒载体的制备
单元12.5 假包膜型反转录病毒载体的制备
单元12.6 高滴定度慢病毒载体产物
单元12.7 构建复制缺陷型疱疹单纯病毒载体
单元12.8 应用辅助病毒缺陷HSV-1扩增载体进行基因传递
单元12.9 脂质体载体用于直接体内基因转染
第13章 基因治疗的转移系统
单元13.1 动脉的基因转移
单元13.2 基因传递到肌肉
单元13.3 脑的基因转移：间接体内法和直接体内法
单元13.4 人造血干细胞的培养、转导和分析
单元13.5 呼吸道基因给药
单元13.6 基因传递到肝脏
参考文献
附录1 试剂与溶液
附录2 有用的信息和数据
附录2A 人类重复DNA序列概述
附录2B ISCN标准核型模式图
附录2C 遗传连锁参考图谱：基于互联网资源的入口
附录2D 放射性同位素数据
附录2E 离心机和转子
附录3 常用技术
附录3A 从哺乳动物细胞中提取基因组DNA
附录3B DNA的抽提和沉淀
附录3C 从固定的石蜡包埋组织切片中制备DNA
附录3D 使用分光光度计和荧光分光光度计测定DNA和RNA的含量
附录3E DNA酶标记法
附录3F 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
附录3G Southern杂交法分析DNA
附录3H Northern杂交分析RNA
附录3I 哺乳动物细胞组织培养技术
附录3J 通过EB病毒转化建立恒定的细胞系
附录3K 核型分析
附录4 一些试剂和仪器提供商
索引中译本序
译者的话
第三版前言
上册
第1章 质粒及其在分子克隆中的应用
第2章 λ噬菌体及其载体
第3章 M13噬菌体载体
第4章 高容量载体的应用
第5章 DNA凝胶电泳和脉冲场琼脂糖凝胶电泳
第6章 真核基因组DNA的制备和分析
第7章 真核细胞mRNA的提取、纯化和分析
第8章 聚合酶链式反应体外扩增DNA
第9章 放射性标记DNA探针与RNA探针的制备
第10章 合成寡核苷酸探针
第11章 cDNA文库制备及其基因鉴定
下册
第12章 DNA测序
第13章 诱变
第14章 表达文库的筛选
第15章 在大肠杆菌中表达克隆化基因
第16章 哺乳动物培养细胞中导入克隆化基因
第17章 哺乳动物培养细胞的基因表达分析
第18章 蛋白质相互作用研究技术
附录
附录1 分子克隆中使用的缓冲液和试剂的配制
附录2 培养基
附录3 载体和细菌菌株
附录4 分子克隆所用的酶
附录5 酶的抑制物
附录6 核酸
附录7 密码子和氨基酸
附录8 分子克隆中的常用技术
附录9 检测系统
附录10 DNA陈列技术
附录11 生物信息学
附录12 告戒
附录13 供应商
附录14 商标
索引序
前言
1 神经生物学实验方法学
1.1 科学思维方法学
1.1.1 科学技术的历史动力
1.1.2 辩证地去求索
1.1.3 辩证地去思考
1.1.4 辩证地去验证
1.1.5 辩证地去训练
1.2 实验设计方法学
1.2.1 选题
1.2.2 专业设计
1.2.3 对照设计
1.2.4 统计设计
1.3 实验分析方法学
1.3.1 数据整理
1.3.2 统计分析
1.3.3 专业分析
1.3.4 论文书写
1.4 电刺激方法学
1.4.1 电刺激的基本原理
1.4.2 电刺激的物理特性
1.4.3 神经制备的生物特性
1.4.4 选择性刺激
1.4.5 刺激电流扩散
1.5 电记录方法学
1.5.1 容积导体内记录
1.5.2 诱发电位记录
1.5.3 单单位记录
1.5.4 计算机辅助的记录
1.5.5 细胞内记录
1.5.6 膜片钳记录
1.5.7 神经纤维速度谱测定
1.5.8 轴突分叉点位置测定
1.5.9 压脚痛阈测定法
1.6 神经化学方法学
1.6.1 组织细胞破碎法
1.6.2 突触体制备
1.6.3 电泳法
1.6.4 色谱法
1.6.5 高效液相色谱法
1.6.6 微透析技术
1.7 化学神经解剖学方法学
1.7.1 免疫细胞化学技术
1.7.2 原位杂交组织化学技术
1.7.3 受体定位技术
1.7.4 免疫电子显微镜技术
1.8 神经形态学方法学
1.8.1 辣根过氧化物酶示踪技术
1.8.2 荧光素示踪技术
1.8.3 放射性核素示踪技术
1.8.4 顺行示踪技术
1.8.5 激光扫描共焦显微镜技术
1.8.6 定量及分析细胞学技术
1.9 分子神经生物学方法学
1.9.1 核酸分子杂交技术
1.9.2 蛋白质印迹法
1.9.3 DNA重组技术
1.9.4 聚合酶链反应技术
1.9.5 DNA序列测定技术
1.9.6 mRNA差异显示技术
1.9.7 基因芯片技术
1.9.8 转基因动物技术
1.10 神经行为学实验方法学
1.10.1 行为学实验的神经基础及常用动物
1.10.2 常用的高级脑功能研究方法
1.10.3 常用痛行为研究方法
1.11 脑成像
1.11.1 计算机辅助体层摄影
1.11.2 磁共振成像
1.11.3 放射性核素断层成像
1.11.4 超声成像
2 神经生物学实验与示教
2.1 神经生理学实验
2.1.1 家兔外周神经干复合动作电位记录
2.1.2 家兔后肢传入神经纤维速度谱
2.1.3 扩张肛门对猫骶神经后根放电的影响
2.1.4 大鼠脊髓节段性及下行性诱发电位记录
2.1.5 脊髓节段性缺血时脊髓诱发电位的变化
2.1.6 家兔大脑皮质体感诱发电位记录
2.1.7 脑缺血对家兔大脑皮质诱发电位的变化
2.1.8 蟾蜍离体脊神经节神经元静息膜电位与动作电位记录
2.1.9 大鼠培养脑细胞膜的电学特性
2.1.10 大鼠在体脊神经节神经元动作电位的细胞内记录
2.1.11 猫脊髓背索突触后神经元的细胞内与细胞外记录
2.1.12 猫脊颈束-背索突触后神经元的顺、逆向反应
2.1.13 大鼠脊髓背角神经元电活动的细胞内记录
2.1.14 大鼠脊孤束-背索突触后神经元对躯体与内脏传入的反应
2.1.15 家兔中缝大核对外周传入刺激的反应
2.1.16 家兔丘脑腹后外侧核电活动的细胞外记录
2.1.17 躯体内脏传入在脊髓背角的相互作用
2.1.18 缺氧预适应鼠脑提取液对ATP敏感性钾电流的作用
2.2 神经化学实验
2.2.1 缺氧耐受小鼠脑匀浆提取液的抗缺氧作用
2.2.2 急性重复缺氧小鼠脑单胺类含量的变化
2.2.3 不同强度躯体刺激对家兔脑脊液中Ca2+、Mg2+含量的影响
2.2.4 不同强度躯体刺激对家兔脑脊液中单胺类含量的影响
2.2.5 兔脑内腺苷的微透析法测定
2.2.6 缺氧对小鼠大脑皮质突触体LDH透出率的影响
2.2.7 低氧预适应小鼠脑匀浆提取液对PC12细胞的保护效应
2.3 神经组织免疫细胞化学实验
2.3.1 延髓背角和中缝大核内的P物质样阳性结构——免疫细胞化学或免疫荧光细胞化学染色法
2.3.2 大鼠三叉神经节内阿片μ受体与降钙素基因相关肽共存的阳性神经元——免疫荧光细胞化学双重标记染色法
2.3.3 大鼠延髓背角浅层内P物质样阳性终末与含钙结合蛋白神经元的联系——免疫荧光细胞化学双标染色及激光扫描共焦显微镜观察
2.3.4 面口部注射甲醛溶液后大鼠延髓背角内的FOS样阳性神经元观察——免疫细胞化学染色法
2.3.5 大鼠中缝核簇内5-羟色胺样阳性神经元表达FOS蛋白——免疫细胞化学双标染色法
2.3.6 大鼠延髓背角内向丘脑投射的FOS样阳性神经元——逆行标记与免疫细胞化学双标染色法
2.3.7 大鼠三叉神经节内钙结合素mRNA阳性神经元的分布——放射性核素标记的原位杂交组织化学法
2.3.8 大鼠中脑导水管周围灰质内的5-羟色胺样阳性亚微结构——免疫电镜法
2.3.9 大鼠孤束核内GABA能纤维终末与P物质受体样阳性神经元的突触联系——包埋前与包埋后免疫电镜双标记法
2.3.10 大鼠延髓背角内GABA能神经元与P物质能纤维终末的突触联系——包埋前免疫电镜双标记法
2.4 神经形态学实验
2.4.1 大鼠脊髓灰质向孤束核的投射
2.4.2 猫脊髓背角神经元向外侧颈核和背索核的分支投射
2.4.3 大鼠脊孤束-背索突触后神经元的超(亚)微结构
2.4.4 大鼠脊孤束-背索突触后神经元对躯体感觉核与内脏感觉核的分支投射
2.4.5 大鼠脊髓立体定位磁控过半夹断模型
2.4.6 大鼠臂旁核向杏仁中央核的投射——HRP逆行追踪方法
2.4.7 大鼠中脑导水管周围灰质向伏核的5-羟色胺能投射——HRP逆行追踪与免疫细胞化学染色相结合的双标记法
2.4.8 大鼠延髓背角内P物质受体样阳性神经元向丘脑胶状质核投射——荧光素逆行追踪与免疫荧光染色相结合的双标记方法
2.4.9 大鼠中缝大核向脊髓背角和延髓背角的分支投射——荧光素双标记法
2.4.10 中脑导水管周围灰质和中缝背核内5-羟色胺能神经元的下行分支投射——荧光素双标记与免疫荧光染色相结合的三标记法
2.4.11 大鼠三叉神经脊束核吻侧亚核向三叉神经运动核的投射——植物凝集素(PHA-L)顺行示踪法
2.4.12 大鼠延髓背角浅层向臂旁外侧核及丘脑腹后内侧核的投射——BDA顺行示踪法
2.4.13 大鼠中脑导水管周围灰质-中缝大核-三叉神经感觉核簇的间接投射——PHA-L顺行示踪与HRP逆行追踪相结合的双标记法的光镜观察
2.4.14 大鼠中脑导水管周围灰质-中缝大核-三叉神经脊束核尾侧亚核的间接投射——PHA-L顺行示踪与HRP逆行追踪相结合的双标记法的电镜观察
2.4.15 大鼠延髓背角向丘脑投射神经元与5-羟色胺阳性终末的突触联系——HRP逆行追踪与免疫细胞化学染色双标记法
2.4.16 大鼠孤束核-臂旁核-中央杏仁核的间接投射通路——溃变与HRP逆行追踪相结合的双标记法
2.5 分子神经生物学实验
2.5.1 用差异显示法分离特异表达的基因片段
2.5.2 慢性缺氧培养细胞中缺氧诱导因子-1的提取与检测
2.5.3 大鼠三叉神经节总RNA的提取及cDNA的制备
2.5.4 5-HT3受体亚型mRNA在大鼠三叉神经节的表达
2.5.5 乙酰胆碱转移酶在大鼠纹状体的表达及其DNA片段的回收
2.5.6 乙酰胆碱转移酶DNA片段的亚克隆
2.5.7 ChAT-pGEM重组质粒DNA的制备及限制性酶酶切分析
2.5.8 ChAT-pGEM重组质粒DNA序列的测定
2.5.9 乙酰胆碱转移酶表达蛋白的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析
2.5.10 乙酰胆碱转移酶在大鼠纹状体分布的Western印迹检测
2.5.11 性激素对周围伤害性刺激诱导脊髓PPDmRNA表达上调的影响
2.5.12 坐骨神经部分切断后初级感觉神经元(背根节)的差异表达基因克隆
2.6 神经行为学实验
2.6.1 一足致炎大鼠双足痛感受性的变化
2.6.2 甲醛溶液致炎大鼠疼痛行为的观察
2.6.3 神经反射在一足致炎大鼠非致炎足痛阈变化中的作用
2.6.4 体液因素在一足致炎大鼠非致炎足痛阈变化中的作用
2.6.5 急性缺氧预适应对小鼠缺氧耐受性的影响
2.6.6 麻醉与兴奋小鼠缺氧耐受性的变化
2.6.7 大鼠脊髓横断及半横断模型的复制
2.6.8 慢性束缚应激对大鼠空间学习记忆能力的影响
2.6.9 创伤后应激障碍模型大鼠的自发活动和焦虑水平检测
3 神经生物学资料
3.1 神经生物学常见概念
3.1.1 生物电学常见概念
3.1.2 生物化学常见词汇
3.1.3 细胞培养常见词汇
3.1.4 分子生物学常见词汇
3.2 常用的实验方法
3.2.1 电生理学仪器方法
3.2.2 动物实验的实施
3.3 实验动物常用数据
3.3.1 实验动物常用生理数据
3.3.2 实验动物常用麻醉剂与肌肉松弛剂
3.4 常用试剂、缓冲液、贮存液与酶的配制
3.4.1 组织培养常用试剂
3.4.2 电泳缓冲剂
3.4.3 常用贮存液
3.4.4 常用酶的配制
3.5 常用限制性酶识别序列
3.6 常用细胞系、细胞培养基、抗生素
3.6.1 细胞系
3.6.2 常用培养液成分及配方
3.6.3 抗生素
3.7 核酸、蛋白质常用数据及相对分子质量标准参照物
3.7.1 常用核酸的长度与相对分子质量
3.7.2 常用蛋白质分子质量标准参照物
3.8 赫尔辛基宣言Ⅱ
中译本序
前言
第1章 单分子生物学的新时代
第2章 采用全内反射显微镜的单分子荧光共振能量转移技术
第3章 在体和离体条件下用单纳米精度的荧光成像技术观察分子马达的步行
第4章 荧光探针共定位： 具有纳米级分辨率的精准定位
第5章 交替激光激发的单分子检测
第6章 采用偏振全内反射荧光显微术观察单分子的取向和旋转
第7章 单分子水平的活细胞基因表达的成像
第8章 活细胞内单个病毒的示踪
第9章 采用荧光量子点进行活细胞超敏感成像
第10章 活体实时基因表达成像技术
第11章 活细胞内随机信号转导事件的单分子成像技术
第12章 离体和在体的荧光相关光谱术
第13章 采用光阱技术研究分子马达的性质
第14章 高分辨双光阱光镊的差分检测
第15章 肌动球蛋白马达的成像和纳米操纵技术
第16章 采用磁阱技术的单分子研究
第17章 利用原子力显微镜进行多糖和蛋白质的力学探测
第18章 用纳米孔技术进行核酸及DNA-蛋白质相互作用的单分子研究
第19章 无外部负载、具有高时空分辨率的单分子纳米金颗粒示踪技术
第20章 基于表面的单分子检测技术的进展
第21章 液流牵张力分析法用于核酸-蛋白质相互作用的单分子研究
附录 警示
索引
图版
译者序
原著序
缩写
第一篇 确定方向
第1章 普通实验室的组织进程
第2章 实验室的建立与设备
第3章 开始与组织
第2篇 策划实验教程
第4章 如何建立实验
第5章 实验室记录本
第6章 陈述你自己和你的数据
第3篇 实验部分
第7章 配制试剂和缓冲液
第8章 贮藏和处理
第9章 无菌技术操作
第10章 真核细胞的培养
第11章 细菌
第12章 DNA、RNA和蛋白质
第13章 放射性
第14章 离心
第15章 电泳
第16章 光学显微镜
词汇和解释译者的话
前言
缩略语
插图一览表
彩图一览表
1.1 历史背景
1.2 组织培养的优点
1.3 局限性
1.4 体外的主要差异
1.5 组织培养的类型
第2章 培训纲要
2.1 目的
2.2 基本练习
2.3 高阶练习
2.4 特殊练习
第3章 培养细胞的生物学
3.1 培养细胞的环境
3.2 细胞黏附
3.3 细胞增殖
3.4 细胞分化
3.5 细胞信号传递
3.6 能量代谢
3.7 培养的开始
3.8 细胞系的演化
3.9 连续细胞系的形成
3.10 培养细胞的起源
第4章 实验室设计与布局
4.1 规划
4.2 建设与使用
4.3 无菌室或套室布局
4.4 培养
4.5 准备室
第5章 设备
5.1 组织培养实验室的要求
5.2 无菌区
5.3 培养
5.4 准备和灭菌
5.5 储存
5.6 实验室
5.7 专用设备
5.8 消耗性物品
第6章 无菌技术
6.1 无菌技术的目标
6.2 创造无菌环境的各种因素
6.3 灭菌操作
6.4 层流
6.5 标准方法
6.6 仪器和设备
第7章 安全性、生物伦理及验证
7.1 实验室安全
7.2 危险性评估
7.3 标准操作程序
7.4 安全规则
7.5 常规安全
7.6 火
7.7 放射性
7.8 生物危害性
7.9 生物伦理
7.10 验证
第8章 培养器皿和附着物
8.1 附着物
8.2 培养器皿的选择
8.3 特殊系统
8.4 表面处理
第9章 成分明确培养基及补充物
9.1 培养基的发展史
9.2 物理化学特征
9.3 平衡盐溶液
9.4 完全培养基
9.5 血清
9.6 培养基和血清的选择
9.7 其他添加物
第10章 无血清培养基
10.1 含血清培养基的缺点
10.2 无血清培养基的优点
10.3 无血清培养基的缺点
10.4 血清的替代
10.5 无血清培养基的选择
10.6 无血清培养基的研发
10.7 无血清培养基的制备
10.8 无蛋白培养基
10.9 小结
第11章 准备与灭菌
11.1 准备试剂与用品
11.2 设备与液体的灭菌
11.3 设备
11.4 试剂与培养基
11.5 培养基的灭菌
11.6 培养基的质控、检测和储存
第12章 原代培养
12.1 原代培养的类型
12.2 组织分离
12.3 原代培养
第13章 传代培养和细胞系
13.1 传代培养和扩增
13.2 术语定义
13.3 培养物的年龄
13.4 细胞系的命名
13.5 选择细胞系
13.6 常规培养
13.7 传代
第14章 克隆培养及筛选
14.1 克隆培养
14.2 贴壁率的刺激
14.3 悬浮克隆培养
14.4 细胞克隆的分离
14.5 复制性培养
14.6 选择性抑制剂
14.7 遗传变异细胞的筛选
14.8 细胞与基质的相互作用
第15章 细胞分离
15.1 细胞密度及等密度沉降法
15.2 细胞体积与沉降速度
15.3 以抗体为基础的分离技术
15.4 荧光活化的细胞分选法
15.5 其他分离技术
15.6 初试细胞分离者的选择
第16章 细胞鉴定
16.1 鉴定的需求
16.2 保存记录和身世
16.3 真实性验证
16.4 细胞形态学
16.5 染色体含量
16.6 DNA含量
16.7 RNA和蛋白质表达
16.8 酶活性
16.9 抗原标记
16.10 分化
第17章 分化
17.1 体内表现型的表达
17.2 分化的各个阶段
17.3 增殖和分化
17.4 定向和细胞谱系
17.5 干细胞的可塑性
17.6 分化标记物
17.7 诱导分化
17.8 分化和恶性
17.9 应用
第18章 转化和永生化
18.1 细胞系特性的作用
18.2 什么是转化
18.3 遗传不稳定性
18.4 永生性
18.5 生长控制的异常
18.6 肿瘤发生
第19章 污染
19.1 污染源
19.2 微生物污染的类型
19.3 污染的检测
19.4 污染的去除
19.5 交叉污染
19.6 结论
第20章 细胞冷冻保存
20.1 冷冻保存的必要性
20.2 冷冻保存细胞系的获得
20.3 冷冻保存的原理
20.4 冷冻储备的设计与控制
20.5 细胞库
20.6 细胞的运送
第21章 定量
21.1 细胞计数
21.2 细胞重量
21.3 DNA含量
21.4 蛋白质
21.5 合成率
21.6 酶检测和免疫检测标本的制备
21.7 细胞计数术
21.8 重复取样问题
21.9 细胞增殖
21.10 贴壁效率
21.11 标记指数
21.12 细胞周期时间
21.13 细胞迁移
第22章 细胞毒性
22.1 活性、毒性和存活
22.2 体外局限性
22.3 分析的性质
22.4 细胞毒性试验的应用
22.5 转化和诱变
22.6 炎症反应
第23章 特殊类型细胞的培养
23.1 特殊细胞培养技术
23.2 上皮细胞
23.3 间充质细胞
23.4 神经外胚层细胞
23.5 造血细胞
23.6 生殖腺
23.7 干细胞
第24章 肿瘤细胞培养
24.1 肿瘤细胞培养中的问题
24.2 取材
24.3 分离
24.4 原代培养
24.5 肿瘤细胞的特征
24.6 细胞系的建立
24.7 肿瘤细胞的选择培养
24.8 特殊类型肿瘤
第25章 器官型培养
25.1 细胞的相互作用和表型表达
25.2 器官培养
25.3 组织型培养
25.4 三维构建物中细胞的成像
第26章 规模培养
26.1 悬浮规模培养
26.2 单层规模培养
26.3 程序控制
第27章 特殊技术
27.1 淋巴细胞的分离
27.2 放射自显影术
27.3 间隔性记录
27.4 共聚焦显微镜
27.5 细胞同步化
27.6 羊膜细胞培养
27.7 冷血动物细胞的培养
27.8 原位分子杂交
27.9 体细胞融合
27.10 单克隆抗体的制备
27.11 DNA转移
第28章 问题与对策
28.1 细胞生长缓慢
28.2 培养基
28.3 配制培养基各种成分的纯度
28.4 塑料制品
28.5 玻璃器皿
28.6 微生物污染
28.7 化学污染
28.8 原代培养
28.9 分化
28.10 饲养层
28.11 传代
28.12 克隆
28.13 交叉污染
28.14 冻存
28.15 细胞呈颗粒性
28.16 细胞计数
28.17 存活率
第29章 结语
附录Ⅰ 试剂及配制
附录Ⅱ 设备及材料来源
附录Ⅲ 供应商和其他资源
附录Ⅳ 术语
附录Ⅴ 普通教科书及相关期刊
参考文献
索引
彩图第一部分 DNA分析
第一章 从组织或培养细胞同时分离DNA与RNA
第二章 DNA的限制性内切酶消化
第三章 琼脂糖凝胶电泳
第四章 琼脂糖凝胶电泳的印迹转移
第五章 应用随机引物的32p标记DNA探针的制备
第六章 Southern印迹的杂交和竞争性杂交
第七章 Southern杂交中地高辛修饰的核苷酸标记DNA探针的应用
第八章 荧光素标记核酸探针的制备及其碱性磷酸脂酶催化的二氧杂环烷化学发光反应检测
第九章 监测核酸探针中荧光素标记水平的快速检测
第十章 辣根过氧化物酶标记的核酸探针制备及其强化的化学发光反应检测
第十一章 寡核苷酸3'端的荧光素-11-dUTP标记及其强化的化学发光反应检测
第十二章 RNA探针的制备
第十三章 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
第十四章 核酸的银染检测
第十五章 DNA片段的末端标记
第二部分 RNA分析
第十六章 Northern印迹分析
第十七章 RNA狭缝印迹分析-
第十八章 RNase保护测定法
第十九章 mRNA的引物延伸分析
第二十章 应用单链DNA探针的S1定位法
第二十一章 细胞及组织的非放射性原位杂交
第三部分 基因克隆技术
第二十二章 DNA的体外包装
第二十三章 应用人置换型载体构建哺乳动物基因组文库
第二十四章 用于构建文库的双链cDNA制备
第二十五章 cDNA文库的构建
第二十六章 人文库的筛选
第四部 分亚克隆方法
第二十七章 亚克隆的策略与方法
第二十八章 应用玻璃珠从琼脂糖凝胶中纯化DNA片段
第二十九章 大肠杆菌的转化
第三十章 细菌的电击穿孔转化
第三十一章 应用碱裂解法制备质粒DNA
第三十二章 应用快速煮沸法制备小量质粒DNA
第三十三章 应用硅藻土制备质粒DNA
第五部分 PCR技术
第三十四章 聚合酶链式反应：基本方法
第三十五章反向聚合酶链式反应
第三十六章 应用以简并寡核背酸为引物的PCR技术克隆基因家族成员
第三十七章 应用T-载体克隆PCR产物
第三十八章 PCR产物的直接放射性标记
第三十九章 应用PCR技术快速筛选含克隆片段的菌落
第四十章 应用PCR技术筛选噬菌体文库
第六部分 DNA序列测定
第四十一章 应用M13噬菌体作为载体克隆DNA片段
第四十二章 应用外切核酸酶Ⅲ制备有序缺失系列
第四十三章 M13噬菌体生长和单链DNA制备
第四十四章 从噬粒载体制备ssDNA
第四十五章 用于双脱氧测序的快速质粒纯化法
第四十六章 应用测序酶Version2.0T7DNA聚合酶进行DNA测序
第四十七章 线性和梯度缓冲液测序胶的灌注
第四十八章 测序反应样品的电泳
第四十九章 PCR产物的直接测序
第五十章 应用热循环-双脱氧法进行DNA测序
第五十一章自动DNA测序仪的使用
第五十二章 用于Maxam-GilbertDNA测序法中的DNA末端标记
第五十三章 DNA的化学测序
第七部分 定点诱变与蛋白质合成
第五十四章 双链质粒的定点诱变、结构城置换以及标记获救
第五十五章 应用含尿嘧啶的噬粒为模板的定点诱变法
第五十六章 无细胞系统中的mRNA翻译-兔网织红细胞裂解液
第五十七章 无细胞系统中的mRNA翻译-麦胚提取物
第五十八章 应用6xHis标签和Ni-NTA树脂对重组蛋白进行一步纯化
京公网安备 11010102004214号