本书包括基因工程、蛋白质工程、细胞工程、发酵工程、免疫学方面最新的、应用最广泛的实验技术,共65 个相关实验。各实验的组织结构均包括实验目的、实验原理、器材、操作步骤、结果及思考题,并加强了各实验的安全提示。本书力求能够体现目前最新的技术方法,并且语言简洁、流畅,条理性和可操作性强。
样章试读
目录
- 目 录
前言
第1篇 基因工程
第1章 基因工程常用技术 2
实验1染色体DNA的制备——植物总DNA的提取 3
实验2细菌总DNA的提取 5
实验3动物组织DNA的提取 7
实验4质粒DNA的提取 8
实验5琼脂糖凝胶电泳分离检测DNA 12
实验6 PCR扩增目的基凶 15
实验7琼脂糖凝胶中I)NA片段的回收 19
实验8 D}JA的酶切 22
实验9感受态细胞的制备 26
实验10在质粒载体巾进行外源DNA的克隆 29
实验11质粒DNA的转化 31
实验12基凶定位 34
实验13基冈的定点突变 37
实验14 DNA的随机突变 40
第2章 原核表达体系的应用 43
实验15原核生物巾外源基凶的表达和纯化 43
实验16宏基冈组文库构建 47
实验17 cDNA文库的构建 52
第3章 真核表达体系的应用 66
实验18小鼠p actin基凶的克隆与表达 66
实验19酵母表达体系及酵母双杂交技术 76
实验20植物表达体系 84
第2篇 蛋白质工程
第4章 蛋白质工程常用技术 95
实验21蛋白质末端分析 95
宾验22 SDS_PA(;E电泳分离检测蛋白质 100
实验23离子交换层析纯化牛奶巾的酪蛋白 106
实验24凝胶过滤 115
实验25亲和层析 124
实验26高效液相色谱法测定牛乳中乳白蛋白 127
实验27气相色谱法测定人白蛋白制品巾辛酸钠含量 135
实验28蛋白质二维凝胶电泳技术 139
实验29免疫印迹 149
第3篇 细胞工程
第5章 细胞工程技术 156
实验30菊花的愈伤组织诱导培养 156
实验31菊花愈伤组织的分化培养 165
实验32菊化苗的生根培养 168
实验33植物原生质体分离与融合 169
实验34动物细胞的原代培养 176
实验35动物细胞的传代培养 182
实验36培养细胞的增殖及活力检测 183
实验37流式细胞仪检测技术 187
第4篇 发酵工程
第6章 固体培养技术 192
实验38平菇的同体培养技术 192
第7章 厌氧发酵技术 197
实验39啤酒发酵技术 197
实验40酸奶发酵 205
第8章 好氧分批发酵技术 213
实验41单细胞蛋白好氧分批发酵技术 213
第9章 连续发酵技术 222
实验42酵母的连续发酵技术 222
第10章 动植物细胞悬浮培养技术 229
实验43动物细胞悬浮培养 229
实验44植物细胞悬浮培养 237
实验45共聚焦显微技术 239
第5篇 免 瘦 学
第11章 免疫学技术 246
实验46环状沉淀反应 246
实验47单向琼脂扩散实验 247
实验48双向琼脂扩散实验 249
实验49对流免疫电泳实验 250
实验50火箭电泳实验 252
实验51酶联免疫吸附测定(EI ISA) 253
实验52 BA_ELISA 255
实验53抗原和免疫血清的制备 257
实验54动物细胞免疫荧光技术 259
实验55淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术 261
实验56盐析法纯化免疫球蛋白 265
实验57 DEAE_Sephadex A_50柱层析纯化免疫球蛋白 268
实验58 Sepharose CL 4B亲和柱层析纯化IgG及IgG亚类 270
实验59高效液相色谱法纯化小鼠腹水中单克隆抗体 272
实验60单克隆抗体亲和层析柱纯化重组人a2a干扰素 273
实验61免疫球蛋白酶标记抗体技术 274
实验62荧光素标记抗体技术 276
实验63免疫斑点实验 279
实验64免疫组化染色技术检测淋巴细胞表面标记 281
实验65免疫共沉淀实验 285
参考文献 289
附录1常用缓冲溶液的配制 291
附录2常用培养基的配制 297
附录3不同温度下硫酸铵饱和度计算表 305