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本书按照实验技术自身的体系,分5章全面系统地讲述生物化学与分子生物学的实验技术原理,并将70个难度不等的实验按技术类别分列于5章中,可供不同条件的学校选做。本书适于用作教材,将生物化学与分子生物学实验技术独立设课,通过讲做结合的模式,对生命科学各专业本科生和部分专业硕士研究生进行系统的生物化学与分子生物学技术训练;也可以供有关科技人员参考。
目录
- 前言
第一章 生物化学与分子生物学中的定量分析
第一节 滴定分析法
第二节 紫外可见分光光度法
第三节 荧光分析法
第四节 酶活力及动力学数据的测定
实验1-1粗脂肪的提取和定量测定
实验1-2碘价的测定(Hanus法)
实验1-3皂化价的测定
实验1-4酸价的测定
实验1-5脂肪乙酰价的测定
实验1-6蛋白质的测定(凯氏定氮法)
实验1-7 2,6-二氯酚靛酚法测定维生素C的含量
实验1-8碘量法测定维生素C的含量
实验1-9血糖定量测定(GOD-PAP法)
实验1-10蒽酮比色定糖法
实验1-11肝素钠的容量测定
实验1-12血清胆固醇的定量测定(磷硫铁法)
实验1-13血清总胆固醇的测定(邻苯二甲醛法)
实验1-14双缩脲法测定蛋白质含量
实验1-15Folin试剂法(Lowry法)测定蛋白质含量
实验1-16考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量
实验1-17紫外吸收法测定蛋白质含量
实验1-18紫外吸收法测定核酸含量
实验1-19二苯胺显色法测定DNA含量
实验1-20地衣酚显色法测定RNA含量
实验1-21定磷法测定核酸含量
实验1-22荧光法测定维生素B2含量
实验1-23枯草芽孢杆菌蛋白酶活力测定
实验1-24血清丙氨酸氨基移换酶(ALT)的测定
实验1-25酸性磷酸酯酶的测定
实验1-26碱性磷酸酶的反应动力学性质
第二章 生物大分子的提取、沉淀和离心分离
第一节 生物大分子的提取
第二节 沉淀分离技术
第三节 离心分离技术
实验2-1醇脱氢酶的提纯
实验2-2大蒜细胞SOD的提取与分离
实验2-3大鼠肝rRNA的提取与分离
实验2-4枯草芽杆孢菌碱性磷酸酶的提取与盐析
实验2-5枯草芽孢杆菌DNA的提取与分离
实验2-6酵母RNA的提取与分离
实验2-7从肝脏中提取DNA
实验2-8大肠杆菌细胞膜的分离
实验2-9RNA的蔗糖密度梯度离心分离
实验2-10大鼠肝细胞核的分离
第三章 层析技术
第一节 吸附层析
第二节 分配层析
第三节 凝胶层析
第四节 离子交换层析
第五节 亲和层析
第六节 薄层层析
第七节 气相色谱
第八节 高效液相色谱
实验3-1氨基酸的纸层析
实验3-2微晶纤维素薄板层析法分离氨基酸
实验3-3核苷酸的离子交换层析
实验3-4DNS-氨基酸的聚酰胺薄膜层析
实验3-5凝胶层析测定蛋白质的Mr
实验3-6鸡卵类黏蛋白的制备
实验3-7胰蛋白酶的亲和层析
实验3-8醇酯成分的气相层析
实验3-9HRLC法测定生物类黄酮含量
实验3-1OHPLC法测定维生素A含量
实验3-11HPLC法测定维生素D含量
第四章 电泳技术
第一节 基本原理
第二节 醋酸纤维素薄膜电泳
第三节 琼脂糖凝胶电泳
第四节 聚丙烯酰胺凝胶电泳
第五节 高效毛细管电泳
实验4-1血清蛋白的醋酸纤维素薄膜电泳
实验4-2垂直板PAGE分离血清蛋白
实验4-3SDS-PAGE测定蛋白质的相对分子质量
实验4-4SDS-PAGE的银染色法
实验4-5水平超薄型IEF-PAGE
实验4-6蛋白质的双向凝胶电泳
实验4-7DNA的琼脂糖凝胶电泳
实验4-8PAGE分离RNA
实验4-9对流免疫电泳法测定胎儿甲种球蛋白
实验4-10火箭免疫电泳法测定抗原含量
第五章 分子生物学基本技术
第一节 DNA的体外合成
第二节 核酸的分子杂交
第三节 基因克隆
第四节 基因表达
第五节 转录调控研究技术
实验5-1血液标本中DNA的提取
实验5-2哺乳动物基因组DNA的提取
实验5-3mRNA提取与纯化
实验5-4脉冲电场电泳分离DNA
实验5-5大肠杆菌的转化
实验5-6质粒DNA的提取
实验5-7质粒DNA的酶切及电泳鉴定
实验5-8质粒DNA的分子杂交
实验5-9使用光敏生物素探针的Southern杂交
实验5-1ODNA重组
实验5-11PCR扩增DNA
实验5-12反转录聚合酶链反应(RT-RCR)
实验5-13外源基因在大肠杆菌中的诱导表达
附录 常用缓冲液的配制