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内容简介
本书为蛋白质凝胶电泳的现代理论和实践的专论。全书在详尽地论述聚丙烯酰胺凝胶电泳原理及实验技术的基础上,对等速电泳、聚焦电泳、免疫电泳及双向凝胶电泳等技术作了系统介绍,并介绍了如何应用电子计算机“选择”凝胶电泳最适工作条件的最新技术,附录中列举了蛋白质研究工作中常用的方法和同位素标记蛋白质所应用的各种试剂,便于读者查阅。
本书适于生物化学、免疫学、分子生物学等领域的科学工作者阅读,也可供大专院校基础医学、生物化学等专业师生参考。
目录
- 前言
重要说明
缩写
第1章 聚丙烯酰胺凝胶电泳导论
引言
聚丙烯酰胺凝胶的性质
化学结构
聚合催化剂
有效孔径
实验方法
柱胶和板胶
解离或非解离缓冲系统
连续或不连续(多相)缓冲系统
pH选择
聚合催化剂的选择
凝胶浓度的选择
分子量测定
仪器
成胶装置和贮液槽
电泳所需要的其它装置
聚丙烯酰胺凝胶的制备和电泳
试剂
贮备液
凝胶混合液的制备
柱胶的制备
板胶的制备
样品制备
加样和电泳
电泳后的凝胶分析
凝胶的取出
蛋白质的染色及定量
放射性蛋白质的检定
糖蛋白及磷蛋白的测定
应用免疫学方法检测蛋白质
酶的检测
分离蛋白质的回收
蛋白质区带的定位
蛋白质的洗脱
基本技术的改进
寡肽的分子量分析
特殊蛋白质的分离
组蛋白
浓度梯度凝胶
大批量凝胶
微型柱胶和微型板胶
琼脂糖-丙烯酰胺混合凝胶
均一性和同一性
矫作物及故障
综合性参考文献
第2章 “定量”和制备性的聚丙烯酰胺凝胶电泳
引言
定量PAGE电泳仪概述
凝胶的选择
缓冲系统的选择
不连续的和连续的区带电泳
可供选择的不连续缓冲系统:Jovin输出
定量PAGE方法
策略
最适pH
堆积界限的选择
对蛋白质稳定和分离最佳条件的选择
最适孔径:Ferguson曲线图
同一性试验
分子大小和电荷异构
物理特性
最适分离孔径
制备性PAGE
凝胶切片的提取
连续区带洗脱
第3章 等速凝胶电泳
引言
操作程序
稳态堆积条件的最佳化
堆积区内的分离试验
凝胶切片提取法进行制备性等速电泳
用连续区带洗脱法进行制备性等速电泳
连续区带洗脱法进行制备性稳态堆积
第4章 分析和制备性凝胺聚焦电泳
应用凝胶聚焦电泳的时机
仪器
柱胶与水平板胶装置
电压控制装置
梯度监测装置
凝胶
聚丙烯酰胺凝胶
sephadex凝胶
琼脂糖凝胶
pH梯度的形成
“Ampholine”与缓冲液
两性或非两性载体组分
平坦的和陡峭的pH梯度
pH梯度的直线性
高离子强度下电聚焦
去污剂存在下的聚焦电泳
阳极和阴极电解液的选择
聚焦电泳的动力学
pH梯度
蛋白质
导电性
分析性凝胶聚焦电泳程序
制备性凝胶聚焦电泳
仪器
程序
第5章 双向凝胶电泳
导言
仪器
第一向凝胶
第二向凝胶
双向凝胶电泳的一般技术
溶液和仪器
样品的制备
第一向凝胶的制备
平衡第一向凝胶以便进行第二向分离
第二向凝胶的制备
多肽分布的分析
双向凝胶电泳的比较分析
根据等电点及分子量进行蛋白质双向分离
第一向分离
第二向分离
基本技术的改进
影响分离的因素
膜蛋白分离的改进
特殊类型蛋白质的分离
核糖体蛋白
组蛋白
核蛋白
第6章 蛋白质部分水解后的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳肽图
导言
仪器
方法学
实验步骤
基本技术的改进
资料的解释
第7章 免疫电泳
引言
抗原和抗体的制备
抗原
抗体的产生
抗血清商品
抗体活性分析
IgG抗体的纯化
简易免疫电泳
仪器
试剂
方法
放射免疫电泳
酶检测法
免疫电泳法的其它改进
对流电泳
“火箭”免疫电泳
双向免疫电泳(交叉免疫电泳)
故障
综合性参考文献
附录Ⅰ 多肽检测方法文献目录
多肽检测的一般方法
染色法
荧光染色法
直接检测法
以放射性同位素为基础的检测方法
特殊多肽的检测方法
糖蛋白
磷蛋白
核蛋白
具有可以进行反应的巯基蛋白质
含镉蛋白
胶原(蛋白)及原胶原蛋白
免疫方法
酶检测法
附录Ⅱ 同位素标记蛋白质用试剂
一览表
试剂
乙酸酐(3H或14C)
Bolton和Hunter试剂(125I)
溴乙酸(14C)
氯乙酸(14C)
对-氯汞苯磺酸(203Hg)
对-氯汞苯甲酸(203Hg)
丹磺酰氯(5-二甲胺-1-萘磺酰氯)(3H或14C)
DFP(二异丙基氟磷酸)(3H)
乙基亚胺乙酯(14C)
N-乙基马来酰亚胺(14C)
1-氟-2,4-二硝基苯(3H或14C)
甲醛(14C)
碘(125I)
碘乙酰胺(14C)
碘乙酸(3H或14C)
乙磺酰乙酰亚胺(14C)
马来酸酐(14C)
甲基3,5-二碘羟基苯亚胺(125I)
异硫氰酸苯酯(14C或35S)
氢硼化钾(3H)
氢硼化钠(3H)
琥珀酸酐(14C)
N-琥珀酰亚胺丙酸(3H)
附录Ⅲ 选择蛋白质标志物的分子量及等电点
附录Ⅳ 供应电泳专用附件的厂商
参考文献