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本书以新颖、实用为基准,以可操作为目的,把干细胞领域的最新方法及技术加以凝练,按照实验操作指南的格式,对干细胞的分离纯化、鉴定、培养、扩增、诱导分化、核移植、细胞周期与调控、保存、复苏等技术进行系统描述。每一项技术均按基本原理、主要设备与试剂、操作步骤、结果判断、注意事项、参考文献等展开,希望达到系统、科学、全面地介绍干细胞研究的主要技术和实验方法的目的。
本书可用作干细胞研究、开发和应用的工具书,也可供细胞生物学、生物化学、分子生物学、基因组学、医学等相关领域的教学科研人员参考。
目录
- 序
前言
第1章 干细胞的分离纯化
1.1 密度梯度离心法
1.2 单抗贴壁铺展法
1.3 免疫磁珠分选技术
1.4 流式细胞分选法
1.5 组织消化法
主要参考文献
第2章 干细胞的鉴定
2.1 光学显微镜
2.2 电子显微镜
2.3 共聚焦显微镜
2.4 流式细胞术鉴定特异基因的表达
主要参考文献
第3章 胚胎干细胞体外培养与定向诱导分化
3.1 胚胎干细胞分离培养
3.2 小鼠胚胎干细胞定向诱导分化
主要参考文献
第4章 成体干细胞分离培养扩增及体外分化
4.1 造血干/祖细胞
4.2 间充质干细胞
4.3 神经干细胞
4.4 血管内皮祖细胞
4.5 肌肉干细胞
4.6 肝脏干细胞
4.7 胰腺干细胞
4.8 皮肤干细胞的扩增及定向诱导分化
主要参考文献
第5章 干细胞体内增殖分化
5.1 干细胞向成体动物体内移植——NOD/SCB小鼠造血干/祖细胞移植
5.2 干细胞向动物胚胎移植——胚胎干细胞囊胚植入构建嵌合体
5.3 体内可见光成像技术用于干细胞研究
主要参考文献
第6章 干细胞增殖、分化及其调控的分析检测
6.1 干细胞细胞周期检测技术
6.2 干细胞分化检测
6.3 干细胞增殖分化调控的研究策略
6.4 常规操作
6.5 增殖分化调控机制的研究
6.6 干细胞增殖分化调控研究范例Ⅰ——由生命现象到功能分子
6.7 干细胞增殖分化调控研究范例Ⅱ——由功能分子到生命现象的调控
主要参考文献
第7章 核移植技术
7.1 总论
7.2 核移植操作所需的主要设备与试剂
7.3 核移植技术的主要操作步骤
7.4 核移植技术的注意事项及影响因素
主要参考文献
第8章 基因打靶技术
8.1 打靶载体构建
8.2 中靶ES细胞的筛选
主要参考文献
第9章 干细胞与组织工程实验技术
9.1 干细胞与骨组织工程
9.2 干细胞与软骨组织工程
9.3 干细胞与皮肤组织工程
9.4 干细胞与肌腱组织工程
9.5 干细胞与心肌组织工程
9.6 干细胞与血管组织工程
9.7 干细胞与肝组织工程
主要参考文献
第10章 干细胞的保存与复苏
10.1 造血干细胞低温保存的生物学基础
10.2 冷冻保护液的选择
10.3 冷冻保存方法的选择
10.4 冷冻保存的设备
10.5 造血干细胞的低温保存方法
主要参考文献
第11章 干细胞治疗的临床前研究
11.1 有效性研究
11.2 安全性研究
11.3 干细胞的采集、分离、鉴定及体外操作的质量控制
主要参考文献
第12章 干细胞治疗的临床(试验)研究
12.1 临床研究的产生及筹划
12.2 临床研究的不同阶段
12.3 干细胞治疗的临床新技术申请
12.4 干细胞相关的临床试验研究示例
主要参考文献
第13章 干细胞与基因治疗
13.1 基因治疗概述
13.2 病毒介导的基因转导实验技术
13.3 干细胞的转染
13.4 以干细胞为基因导入靶细胞的基因治疗临床应用策略及前景
主要参考文献
附录1 缩略语
附录2 常用溶液配制方法
附录3 主要共聚焦激光对应常用荧光染料表
附录4 合适小鼠卵的培养基配方(g/L)
附录5 Zimmermann细胞融合培养基成分(pH7.O)
附录6 补加锶的M16培养基
附录7 FDA/NlH关于基因治疗的相关文献