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《动物细胞培养——基本技术和特殊应用指南》历来被看作该领域的经典与领衔工作。本版除保留前五版的基本内容（如原代培养、细胞系、传代、分化、细胞特化、污染、无菌技术、细胞毒性、冷冻保存、实验室布局与设备培训纲要等）之外，为反映组织工程与再生医学发展的需要，特地增加了“干细胞”一章，以及某些新的特殊技术。内容新颖，程序可靠。极具参考与模仿价值。

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  前言与致谢
  缩略语
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  彩版目录
  方案目录
  第1章 绪论 1
  1.1 历史背景 1
  1.2 组织培养的优点 7
  1.2.1 环境控制 7
  1.2.2 样品的特征和均一性 8
  1.2.3 经济、规模和机械化 8
  1.2.4 体内环境的体外模拟 8
  1.3 局限性 9
  1.3.1 专业技能 9
  1.3.2 量的问题 9
  1.3.3 去分化和选择 10
  1.3.4 细胞的起源 10
  1.3.5 不稳定性 10
  1.4 体外的丰要差异 10
  1.5 组织培养的类型 11
  第2章 培养细胞的生物学 14
  2.1 培养细胞的环境 14
  2.2 细胞黏附 14
  2.2.1 细胞黏附分子 15
  2.2.2 细胞问连接 16
  2.2.3 细胞外基质 16
  2.2.4 细胞骨架 18
  2.2.5 细胞迁移 18
  2.3 细胞增殖 18
  2.3.1 细胞周期 18
  2.3.2 细胞增殖的调控 19
  2.4 细胞分化 20
  2.4.1 细胞分化的维持 21
  2.4.2 细胞去分化 21
  2.5 细胞信号传递 24
  2.6 能量代谢 25
  2.7 培养细胞的起源 26
  2.7.1 培养的开始 26
  2.7.2 细胞系的演化 27
  2.7.3 细胞的衰老 28
  2.7.4 连续细胞系的转化与形成 28
  第3章 实验室设计、布局及设备 30
  3.1 布局、规划和服务设施 30
  3.1.1 要求 32
  3.1.2 服务设施 34
  3.1.3 通风装置 35
  3.2 布局 35
  3.2.1 无菌操作区 36
  3.2.2 层流原理 36
  3.2.3 工作台 36
  3.2.4 检疫室和防范室 36
  3.2.5 培养 37
  3.2.6 准备区 40
  3.2.7 储存 41
  第4章 设备及材料 44
  4.1 组织培养实验室的要求 44
  4.2 无菌区 46
  4.2.1 洁净台 46
  4.2.2 手推车 48
  4.2.3 无菌液操作——移液和分装 49
  4.2.4 倒置显微镜 53
  4.2.5 CCD摄像机和临视器 54
  4.2.6 解剖显微镜 54
  4.2.7 离心机 54
  4.2.8 细胞计数 55
  4.3 细胞孵育和培养 55
  4.3.1 恒温箱 55
  4.3.2 湿式CO2培养箱 56
  4.3.3 温度记录仪 57
  4.3.4 滚动架 57
  4.3.5 磁力搅拌器 58
  4.3.6 培养器皿 58
  4.4 实验准备和杀菌 58
  4.4.1 清洗 58
  4.4.2 培养基和试剂的制备 59
  4.4.3 杀菌 61
  4.5 储存 63
  4.5.1 消耗品 63
  4.5.2 冰箱和冷冻箱 63
  4.5.3 冷藏器 64
  4.5.4 可控速率冷冻箱 64
  4.6 附属设备 64
  4.6.1 计算机和网络 64
  4.6.2 普通正置显微镜 65
  4.6.3 低温冷冻箱 65
  4.6.4 共聚焦显微镜 65
  4.6.5 PCR循环仪 65
  4.7 专用设备 66
  4.7.1 显微注射装置 66
  4.7.2 集落计数器 66
  4.7.3 可离心淘洗机 66
  4.7.4 流式细胞仪 66
  第5章 无菌技术 67
  5.1 无菌技术的目标 67
  5.1.1 微生物污染的风险 67
  5.1.2 无菌的维持 67
  5.2 创造无菌环境的各种因素 68
  5.2.1 层流 69
  5.2.2 安静的工作区域 71
  5.2.3 工作面 71
  5.2.4 个人卫生 73
  5.2.5 试剂和培养基 73
  5.2.6 培养物 73
  5.3 灭菌操作 73
  5.3.1 擦拭 73
  5.3.2 加盖 74
  5.3.3 灼烧 74
  5.3.4 试剂瓶和培养瓶的操作 74
  5.3.5 移液 75
  5.3.6 液体倾倒 75
  5.4 标准操作程序 76
  5.5 仪器和设备 82
  5.5.1 培养箱 82
  5.5.2 盒装培养物 82
  5.5.3 充入CO2气体 82
  第6章 安全性、生物伦理及验证 83
  6.1 实验室安全 83
  6.2 危险性评估 83
  6.3 标准操作程序 85
  6.4 安全规则 85
  6.5 常规安全 86
  6.5.1 操作者 87
  6.5.2 设备 87
  6.5.3 玻璃器皿和锐利物品 87
  6.5.4 化学毒性 88
  6.5.5 气体 89
  6.5.6 液氮 89
  6.5.7 灼烧 90
  6.6 火 90
  6.7 放射性 91
  6.7.1 摄入 91
  6.7.2 放射性废弃物的处理 91
  6.7.3 标记的试剂 91
  6.7.4 高能源 91
  6.8 生物危害性 92
  6.8.1 生物防范水平 92
  6.8.2 微生物学安全通风橱(MSC) 94
  6.8.3 人体活检材料 96
  6.8.4 遗传操作 97
  6.8.5 生物危害性废弃物处理 97
  6.8.6 熏蒸 97
  6.9 生物伦理 98
  6.9.1 动物组织 98
  6.9.2 人体组织材料 98
  6.10 质量保证 99
  6.10.1 操作程序 100
  6.10.2 质量控制(QC) 100
  6.11 验证 100
  6.11.1 鉴定 100
  6.11.2 来源 101
  6.11.3 污染 101
  第7章 培养器皿和附着物 102
  7.1 附着物 102
  7.1.1 细胞的附着和生氏 102
  7.1.2 常见的附着材料 102
  7.1.3 其他替代性附着物 103
  7.2 表面处理 l03
  7.2.1 基质覆盖 103
  7.2.2 饲养层 105
  7.2.3 非黏附性附着面 106
  7.3 培养器皿的选择 107
  7.3.1 细胞产量 107
  7.3.2 悬浮培养 109
  7.3.3 通风 110
  7.3.4 取样和分析 111
  7.3.5 不均匀生长 112
  7.3.6 价格 112
  7.4 特殊系统 112
  7.4.1 渗透性支持物 112
  7.4.2 三维基质 113
  第8章 成分明确培养基及补充物 115
  8.1 培养基的发展史 115
  8.2 韧理化学特征 115
  8.2.1 pH 115
  8.2.2 CO2和碳酸盐 116
  8.2.3 缓冲作用 123
  8.2.4 氧气 123
  8.2.5 渗透压 124
  8.2.6 温度 124
  8.2.7 黏滞度 125
  8.2.8 表面张力和成泡性 125
  8.3 平衡盐溶液 126
  8.4 完全培养基 126
  8.4.1 氨基酸 127
  8.4.2 维生素 127
  8.4.3 盐类 127
  8.4.4 葡萄糖 128
  8.4.5 有机补充物 128
  8.4.6 激素和生长因子 128
  8.4.7 抗生素 128
  8.5 血清 129
  8.5.1 蛋白质 130
  8.5.2 生长因子 131
  8.5.3 激素 131
  8.5.4 营养物及代谢物 132
  8.5.5 脂类 132
  8.5.6 矿物质 132
  8.5.7 抑制物 132
  8.6 培养基和血清的选择 132
  8.6.1 批次预约 134
  8.6.2 血清的测试 135
  8.6.3 热火活 135
  8.7 其他添加物 136
  8.7.1 氨基酸水解物 136
  8.7.2 胚胎浸出液 136
  8.7.3 适应性培养基 136
  第9章 无血清培养基 137
  9.1 血清的缺点 145
  9.2 无血清培养基的优点 l46
  9.2.1 标准培养基的定义 146
  9.2.2 选择性培养基 146
  9.2.3 调节细胞增殖与分化 146
  9.3 无血清培养基的缺点 l46
  9.4 血清的替代 147
  9.4.1 无血清培养基的商业供应 147
  9.4.2 血清替代物 147
  9.4.3 无血清传代培养 148
  9.4.4 激素 149
  9.4.5 生长因子 149
  9.4.6 血清中的营养物质 154
  9.4.7 蛋白质和多聚胺 154
  9.4.8 黏滞度 154
  9.5 无血清培养基的选择 l54
  9.5.1 细胞或产物特异性 154
  9.5.2 适应无血清培养基 157
  9.6 无血清培养基的研发 157
  9.7 无血清培养基的制备 157
  9.8 无动物蛋白培养基 158
  9.9 小结 158
  第10章 准备与灭菌 159
  10.1 准备试剂与用品 159
  10.2 设备与液体的灭菌 159
  10.3 设备 162
  10.3.1 玻璃器皿 162
  10.3.2 玻璃移液管 165
  10.3.3 螺口盖 168
  10.3.4 清洁剂的选择 170
  10.3.5 种类繁杂的设备 170
  10.3.6 可重复使用的灭菌过滤器 171
  10.4 试剂与培养基 173
  10.4.1 水 173
  10.4.2 纯水器的维护 175
  10.4.3 平衡盐溶液 175
  10.4.4 培养基的配制与灭菌 177
  10.4.5 干粉培养基 180
  10.4.6 特制培养基 182
  10.5 培养基的灭菌 183
  10.5.1 可高压灭菌的培养基 183
  10.5.2 除菌过滤 183
  10.5.3 血清 192
  10.5.4 其他试剂的准备与灭菌 195
  10.6 培养基的质控、检测和储存 196
  10.6.1 质量控制 196
  10.6.2 无菌检测 196
  10.6.3 培养物检测 197
  10.6.4 储存 197
  第11章 原代培养 199
  11.1 原代培养入门 199
  11.1.1 用于解离组织的酶 199
  11.1.2 解离过程的共同特点 200
  11.2 组织分离 200
  11.2.1 小鼠胚胎 200
  11.2.2 鸡胚 204
  11.2.3 人体活检材料 206
  11.3 原代培养的类型 207
  11.3 1 原代外植 207
  11.3.2 酶的解离作用 210
  11.3.3 温胰蛋白酶消化 210
  11.3.4 低温预处理的胰蛋白酶消化 213
  11.3.5 鸡胚器官原基 216
  11.3.6 其他酶解过程 219
  11.3.7 胶原酶 220
  11.3.8 机械法解离 222
  11.3.9 分离活细胞 224
  11.3.10 原代培养小结 225
  11.3.11 原始记录 225
  第12章 传代培养和细胞系 227
  12.1 传代培养和扩增 227
  12.1.1 交叉污染和鉴定错误 229
  12.1.2 支原体污染 231
  12.1.3 术语定义 231
  12.1.4 细胞系的命名 232
  12.1.5 培养物的年龄 233
  12.2 选择细胞系 233
  12.3 常规培养 234
  12.3.1 细胞形态的意义 234
  12.3.2 培养基的更换 235
  12.3.3 标准的换液方案 236
  12.4 传代 238
  12.4.1 传代标准 240
  12.4.2 单层生长细胞典型的传代方案 241
  12.4.3 生长周期和传代比率 243
  12.4.4 传代时的细胞浓度 245
  12.4.5 悬浮培养细胞的扩增 245
  12.4.6 悬浮生氏细胞的传代 246
  12.4.7 培养条件的标准化 248
  12.4.8 抗生素的使用 248
  12.4.9 培养记录 249
  第13章 克隆培养及筛选 251
  13.1 克隆培养 251
  13.2 贴壁率的刺激 255
  13.2.1 促进克隆生长的条件 255
  13.2.2 条件培养基 256
  13.2.3 饲养层细胞 257
  13.3 悬浮克隆培养 259
  13.4 细胞克隆的分离 264
  13.4.1 单层贴蹙细胞克隆的其他分离技术 267
  13.4.2 悬浮细胞克隆 268
  13.5 复制性培养 269
  13.6 选择性抑制剂 269
  13.7 遗传变异细胞的筛选 270
  13.8 细胞与基质的相互作用 272
  13.8.1 选择性黏附 272
  13.8.2 选择性脱蹙 272
  13.8.3 基质性质 273
  13.8.4 选择性饲养层 273
  13.8.5 半固体培养基选择 273
  第14章 细胞分离 275
  14.1 细胞密度及等密度沉降法 275
  14.2 细胞体积与沉降速率 279
  14.2.1 单位重力沉降 279
  14.2.2 离心淘洗分离技术 279
  14.3 以抗体为基础的分离技术 280
  14.3.1 免疫盘化法 281
  14.3.2 免疫磁珠分选 281
  14.4 荧光活化的细胞分选法 284
  14.5 其他分离技术 285
  14.6 初学者如何进行细胞分离实践 286
  第15章 细胞鉴定 287
  15.1 鉴定的需求 287
  15.2 真实性验证 287
  15.3 保存记录和身世 288
  15.4 鉴定指标 288
  15.4.1 种属鉴定 289
  15.4.2 谱系或组织标记 289
  15.4.3 独特标记物 291
  15.4.4 转化 29l
  15.5 细胞形态学 291
  15.5.1 显微镜使用 295
  15.5.2 染色 297
  15.5.3 细胞学检查所用培养器皿：单层培养 299
  15.5.4 悬浮细胞细胞学检查标本的制备 299
  15.5.5 光学显微照相技术 302
  15.6 共聚焦显微镜 303
  15.7 染色体分析 303
  15.7.1 染色体显带技术 306
  15.7.2 染色体分析 307
  15.8 DNA含量 308
  15.8.1 DNA杂交 308
  15.8.2 DNA指纹技术 308
  15.8.3 DNA绘谱 309
  15.9 RNA和蛋白质 314
  15.10 酶活性 314
  15.10.1 同工酶 314
  15.10.2 利用Authentikit进行同工酶电泳 315
  15.11 抗原标记 318
  15.11.1 免疫染色 320
  15.11.2 免疫分析 321
  15.12 分化 322
  第16章 分化 323
  16.1 体内表型的表达 323
  16.1.1 去分化 323
  16.1.2 细胞谱系选择 324
  16.2 分化阶段 324
  16.3 增殖和分化 324
  16.4 定向和细胞谱系 325
  16.5 干细胞可塑性 326
  16.6 分化标记物 327
  16.7 诱导分化 328
  16.7.1 细胞相互作用 328
  16.7.2 全身性因子 330
  16.7.3 细胞-基质相互作用 333
  16.7.4 极性和细胞形状 334
  16.7.5 氧张力 334
  16.8 分化和恶性 334
  16.9 应用 334
  第17章 转化和永生化 336
  17.1 在细胞系鉴定中的作用 337
  17.2 什么是转化 337
  17.3 遗传不稳定性和异质性 338
  17.3 1 遗传不稳定性 338
  17.3.2 染色体畸变 339
  17.4 永生化 339
  17.4.1 衰老的控制 340
  17.4.2 病毒基因致永生化 341
  17.4.3 人成纤维细胞的永生化 342
  17.4.4 端粒酶诱导的永生化 345
  17.4.5 淋巴细胞永生化 350
  17.4.6 转基因鼠 350
  17.5 生长控制异常 350
  17.5.1 停泊不依赖性 350
  17.5.2 接触抑制 351
  17.5.3 血清依赖 353
  17.5.4 癌基因 354
  17.6 致瘤性 354
  17.6.1 恶性化 354
  17.6.2 肿瘤移植 355
  17.6.3 侵袭力 355
  17.6.4 血管发生 356
  17.6.5 纤溶酶原活化因子 359
  第18章 污染 361
  18.1 污染的来源 361
  18.1.1 操作者的技术 363
  18.1.2 环境 364
  18.1.3 层流通风橱的使用和维护 364
  18.1.4 湿度恒温箱 364
  18.1.5 冷藏库 365
  18.1.6 无菌材料 366
  18.1.7 引入的细胞系和活组织 366
  18.1.8 隔离 366
  18.2 徽生物污染的种类 366
  18.3 污染物的监控 366
  18.3.1 可见的微生物污染 367
  18.3.2 支原体 368
  18.3.3 支原体的荧光染色 369
  18.3.4 PCR法检测支原体 370
  18.3.5 检测支原体的替代方法 374
  18.3.6 支原体检测服务 375
  18.3.7 病毒污染 375
  18.4 污染培养物的处理 375
  18.5 污染的去除 376
  18.5.1 细菌、真菌和酵母菌 376
  18.5.2 支原体的消除 377
  18.5.3 清除病毒污染 378
  18.5.4 顽固污染 379
  18.6 交叉污染 379
  18.7 结论 380
  第19章 冻存 381
  19.1 冻存的意义 381
  192 冻存前注意事项 381
  19.2.1 鉴定 382
  19.2.2 何时冻存 382
  19.3 冻存细则 382
  19.3.1 细胞冻存的理论背景 382
  19.3.2 纲胞浓度 382
  19.3.3 冻存液 383
  19.3.4 冷却速度 383
  19.3.5 安瓿 386
  19.3.6 低温冰箱 386
  19.3.7 培养细胞的冻存 389
  19.3.8 冻存记录 391
  19.3.9 安瓿的解冻 392
  19.3.10 培养瓶冻存 394
  19.4 玻璃化保存 394
  19.4.1 hES细胞的冻存 394
  19.4.2 hES细胞解冻 397
  19.5 冻存库的设计和监控 398
  19.5.1 冻存管理 399
  19.5.2 细胞库存的连续更换 399
  19.6 细胞库 400
  19.7 细胞的运输 400
  19.7.1 冻存安瓿 401
  19.7.2 活细胞 401
  第20章 定量 403
  20.1 细胞计数 403
  20.1.1 血细胞计数器 404
  20.1.2 电子计数 407
  20.1.3 染色的单层细胞 411
  20.1.4 流式细胞仪 411
  20.2 细胞质量 413
  20.3 DNA含量 413
  20.4 蛋白质 414
  20.4.1 样品的溶解性 414
  20.4.2 Bradford分析 414
  20.5 合成速率 415
  20.5.1 DNA合成 415
  20.5.2 蛋白质合成 417
  20.6 准备样品用于酶分析和免疫分析 418
  20.7 细胞计数 419
  20.7.1 原位标记 419
  20.7.2 流式细胞术 419
  20.8 重复取样 419
  20.8.1 数据获得 419
  20.8.2 数据分析 420
  20.9 细胞增殖 420
  20.9.1 实验设计 421
  20.9.2 生长周期 421
  20.9.3 单层细胞生长曲线的分析 425
  20.9.4 培养基体积.细胞浓度和细胞密度 427
  20.9.5 悬浮培养 428
  20.9.6 生长周期的各个阶段 429
  20.9.7 生长曲线的衍生物 430
  20.10 贴壁效率 431
  20.10.1 集落形成分析 433
  20.10.2 自动集落计数 434
  20.11 标记指数 434
  20.11.1 生长分数 437
  20.11.2 有丝分裂指数 438
  20.11.3 分裂指数 438
  20.12 细胞周期时间 438
  20.13 细胞迁移 438
  第21章 细胞毒性 439
  21.1 活性、毒性和存活 439
  21.2 体外局限性 440
  21.2.1 药物代谢动力学 440
  21.2.2 新陈代谢 440
  21.2.3 组织和全身反应 440
  21.3 分析的性质 440
  21.3.1 生存力 441
  21.3.2 存活 443
  21.3.3 细胞增殖测定 448
  21.3.4 代谢性细胞毒性测定 448
  21.3.5 微滴定实验 449
  21.3.6 微滴定与克隆存活的比较 453
  21.3.7 药物的相互作用 454
  21.4 细胞毒性实验的应用 454
  21.4.1 抗癌药物筛选 454
  21.4.2 肿瘤药物的前瞻性实验 454
  21.4.3 药物学实验 455
  21.5 基因毒性 455
  21.5.1 姐妹染色单体交换的诱变实验 455
  21.5.2 致癌性 458
  21.6 炎症反应 459
  第22章 特殊类型细胞的培养 461
  22.1 特殊细胞培养技术 463
  22.2 上皮细胞 463
  22.2.1 表皮 464
  22.2.2 角膜 469
  22.2.3 乳腺 471
  22.2.4 子宫颈 473
  22.2.5 胃肠道 476
  22.2.6 肝 478
  22.2.7 原代肝细胞培养 478
  22.2.8 人肝癌细胞系HepaRG 481
  22.2.9 胰 483
  22.2.10 肾 485
  22.2.11 气管和支气管上皮 487
  22.2.12 口腔上皮 489
  22.2.13 前列腺 490
  22.3 间充质细胞 492
  22.3.1 结缔组织 493
  22.3.2 脂肪组织 493
  22.3.3 肌 495
  22.3.4 软骨 501
  22.3.5 骨 504
  22.3.6 内皮细胞 506
  22.4 神经外胚层细胞 512
  22.4.1 神经细胞 512
  22.4.2 神经胶质细胞 513
  22.4.3 内分泌细胞 519
  22.4.4 黑素细胞 520
  22.5 造血细胞 523
  22.6 生殖腺 524
  22.6.1 卵巢 524
  22.6.2 睾丸 524
  第23章 干细胞、生殖细胞和羊水细胞 525
  23.1 干细胞 525
  23.1.1 胚胎干细胞 525
  23.1.2 小鼠胚胎干细胞的诱导 525
  23.1.3 小鼠胚胎干细胞的传代培养和扩增 530
  23.1.4 人胚胎干细胞的原代培养 532
  23.1.5 hES细胞的传代 534
  23.1.6 鱼胚胎来源的多能干细胞 535
  23.2 生殖细胞 539
  23.3 胚外细胞 540
  23.3.1 羊水细胞的培养 540
  23.3.2 从新生儿或青年来源的细胞 544
  23.3.3 成人来源的多能干细胞 544
  23.3.4 人骨髓来源间充质干细胞 545
  23.3.5 诱导多潜能干细胞 548
  23.3.6 小鼠骨髓长期培养 552
  23.3.7 人原始造血细胞长期培养 554
  23.3.8 造血细胞集落形成分析 559
  第24章 肿瘤细胞培养 562
  24.1 肿瘤细胞培养中的问题 562
  24.2 取材 563
  24.2.1 代表性细胞的选择 563
  24.2.2 冷冻组织保存 564
  24.3 分离 564
  24.4 原代培养 565
  24.5 肿瘤细胞的选择培养 566
  24.5.1 选择培养基 566
  24.5.2 汇合饲养层 566
  24.5.3 悬浮克隆 569
  24.5.4 异种移植 569
  24.6 细胞系的建立 570
  24.6.1 原代肿瘤培养物的传代 570
  24.6.2 连续细胞系 570
  24.7 肿瘤细胞培养物的特征 571
  24.7.1 肿瘤细胞的异质性 571
  24.7.2 组织型培养 572
  24.8 特殊类型肿瘤 572
  24.8.1 乳腺 572
  24.8.2 肺 574
  24.8.3 胃 575
  24.8.4 结肠 575
  24.8.5 胰腺 578
  24.8.6 卵巢 578
  24.8.7 前列腺 578
  24.8.8 膀胱 579
  24.8.9 皮肤 579
  24.8.10 子宫颈 580
  24.8.11 胶质细胞瘤 580
  24.8.12 神经母细胞瘤 581
  24.8.13 精原细胞瘤 581
  24.8.14 淋巴瘤和白血病 581
  第25章 三维培养 583
  25.1 细胞的相互作用和表型表达 583
  25.1.1 细胞密度的作用 583
  25.1.2 相互作用 584
  25.1.3 模型的选择 584
  25.2 器官培养 586
  25.2.1 气体和营养物质的交换 586
  25.2.2 结构的完整性 586
  25.2.3 生长与分化 587
  25.2.4 器官培养的限制 587
  25.2.5 器官培养的类型 587
  25.3 组织型培养 589
  25.3.1 凝胶和海绵技术 589
  25.3.2 中空纤维 590
  25.3.3 球体 590
  25.3.4 转动室系统 593
  25.3.5 藻酸盐活细胞固定术 594
  25.3.6 滤膜培养皿 594
  25.3.7 神经聚集物的培养 597
  25.4 器官型培养 599
  25.4.1 组织等同物 599
  25.4.2 组织工程 599
  25.5 三维构建物中细胞的成像 601
  第26章 规模与自动化 602
  26.1 悬浮规模培养 602
  26.1.1 连续培养 605
  26.1.2 规模和复杂性 606
  26.1.3 搅匀和换气 608
  26.2 单层规模培养 610
  26.2.1 多表面扩增器 610
  26.2.2 旋转培养 613
  26.2.3 微载体 615
  26.2.4 巨型微载体 617
  26.2.5 灌流式单层培养 619
  26.3 程序控制 620
  26.4 自动化 621
  26.4.1 机器人细胞培养 621
  26.4.2 高产量检测 622
  第27章 特殊技术 624
  27.1 淋巴细胞的制备 624
  27.1.1 隔离的密度 624
  27.1.2 淋巴母细胞的转化 625
  27.2 放射自显影术 626
  27.3 间隔性记录 632
  27.4 细胞同步化 634
  27.4.1 细胞分离 634
  27.4.2 阻断 635
  27.5 冷血动物细胞的培养 635
  27.5.1 鱼细胞 636
  27.5.2 昆虫细胞 636
  27.6 体细胞融合 637
  27.6.1 细胞杂交 637
  27.6.2 移核实验 640
  27.7 单克隆抗体的制备 640
  第28章 培训纲要 646
  28.1 目的 646
  28.2 实验制备及操作技巧 647
  28.3 基本的细胞培养技术 660
  28.4 高阶练习 682
  28.5 特殊练习 697
  第29章 问题与对策 698
  29.1 细胞异常形态 698
  29.2 细胞生长缓慢 699
  29.2.1 仅限于自己细胞出了问题 699
  29.2.2 其他人也遇到同样的问题 699
  29.3 培养基 700
  29.3.1 试剂配方、准备和存储 700
  29.3.2 不稳定试剂 701
  29.3.3 配制培养基各种成分的纯度 702
  29.4 基质和容器 703
  29.5 微生物污染 703
  29.5.1 仪限于单个实验者的问题 704
  29.5.2 普遍问题 705
  29.5.3 室内供气和层流净化工作台 706
  29.5.4 特定污染 706
  29.6 化学污染 707
  29.6.1 玻璃器皿 707
  29.6.2 移液管 707
  29.6.3 水的纯化 707
  29.6.4 低温冻存 707
  29.6.5 粉末或气溶胶 708
  29.7 原代培养 708
  29.7.1 原代培养的存活率低 708
  29.7.2 选择细胞错误 709
  29.7.3 污染 709
  29.8 分化 710
  29.9 饲养层 710
  29.9.1 常规单层培养 710
  29.9.2 克隆培养 710
  29.10 传代 711
  29 10.1 收获率低或生长缓慢 711
  29.10.2 生长不均匀 711
  29.11 克隆 712
  29.11.1 培养皿形成的克隆数过低 712
  29.11.2 培养皿形成的克隆数太多 713
  29.11.3 非随机分布 713
  29.12 交叉污染和错误标记 713
  29.13 冻存 714
  29.13.1 复苏时存活率低 714
  29 13.2 冻存后细胞形态发生变化 714
  29.13.3 冻存细胞丢失 715
  29.14 细胞计数 715
  29.14.l 血细胞计数板 715
  29.14.2 使用电阻抗法电子计数仪 715
  第30章 结语 717
  附录I 计算配制及试剂制备 719
  附录II 设备及材料来源 733
  附录III 供应商和其他资源 763
  附录IV 术语 779
  附录V 交叉污染或鉴定有误的细胞系 789
  附录VI 般教材与相关期刊 809
  参考文献 811
  索引 883
  图片目录
  图1.1 组织培养的发展
  图1.2 组织培养的应用
  图1.3 组织培养的类型
  图2.1 细胞黏着
  图2.2 细胞问连接
  图2.3 生长在matrigel上的A549细胞
  图2.4 细胞周期
  图2.5 细胞分化与增殖
  图2.6 干细胞的分化
  图2.7 细胞定型和逆转性
  图2.8 细胞瓦作和信号转导
  图2.9 细胞系的演化
  图2.10 有限的和连续的细胞系染色体数目
  图3.1 小型组织培养实验室
  图3.2 中型组织培养实验室
  图3.3 带有毗邻准备室的组织培养实验室
  图3.4 大型组织培养实验室
  图3.5 气压平衡装置
  图3.6 温室
  图3.7 洗涮水槽和吸管冲洗器
  图3.8 液氮储存和冷冻罐储存
  图4.1 洁净台
  图4.2 加样器
  图4.3 移液器
  图4.4 带刻度的分装瓶
  图4.5 筒型分装器
  图4.6 自动分装器
  图4.7 平板加样器和平板阅读器
  图4.8 移液装置
  图4.9 培养基抽吸
  图4.10 倒置显微镜
  图4.11 培养室
  图4.12 CO2培养箱
  图4.13 CO2培养箱设计图
  图4.14 玻璃器皿清洗机
  图4.15 纯水仪
  图4.16 顶盖式高压蒸汽灭菌锅
  图4.17 独立式高压蒸汽灭菌器
  图4.18 离心管
  图5.1 感染的可能性
  图5.2 组织培养工作区
  图5.3 洁净台的气流
  图5.4 工作区布局
  图5.5 水平层流超净台布局
  因5.6 开放式工作台工作区布局
  图5.7 持盖和胶头吸管的方法
  图5.8 废液烧杯
  图5.9 移液管插入移液控制器的方法
  图5.10 倾斜式培养瓶
  图5.11 盒装培养皿
  图5.12 向培养瓶吹气
  图6.1 装载过满的吸管筒
  图6.2 将吸管安装到移液器上的方法
  图6.3 钢瓶充装夹具
  图6.4 用于器械消毒的双层三角乙醇瓶
  图6.5 微生物学安全性通风橱
  图7.1 饲养层细胞的形态学
  图7.2 培养基体积和细胞产量与培养器皿有效面积的关系
  图7.3 多孔培养板
  图7.4 培养皿
  图7.5 塑料培养瓶
  图7.6 多而培养瓶
  图7.7 搅拌培养瓶
  图7.8 通气型培养皿和培养瓶
  图7.9 带螺帽的小瓶和三角瓶
  图7.10 非随机生长
  图7.11 中空纤维培养系统
  图8.1 HEPES和碳酸氢盐的缓冲能力
  图8.2 渗透压计
  图10.1 消毒锅中湿度对温度的影响
  图10.2 玻璃器皿的清洗与灭菌
  图10.3 消毒带盖的瓶子
  图10.4 虹吸移液管清洗机
  图10.5 吸管的清洗和消毒
  图10.6 半自动吸管填塞器(Bellco)
  图10.7 灭菌烤箱
  图10.8 包装螺口盖进行灭菌
  图10.9 水的纯化
  图10.10 无菌过滤
  图10.11 次性除菌过滤器
  图10.12 蠕动泵过滤器
  图10.13 大批量连线式过滤装置
  图10.14 灭菌滤器的选择
  图10.15 可重复使用的过滤器
  图10.16 预过滤器
  图11.1 每只小鼠胚胎的总湿重与细胞产量
  图11.2 小鼠胚胎
  图11.3 小鼠的解剖
  图11.4 自鸡蛋中取出鸡胚
  图11.5 原代培养的选择
  图11.6 原代外植块培养
  图11.7 温胰蛋白酶消化
  图11.8 细胞滤器
  图11.9 冷胰蛋白酶消化
  图11.10 温胰蛋白酶消化和冷胰蛋白酶消化
  图11.11 鸡胚的分离
  图11.12 用胶原酶解离组织
  图11.13 机械法解离
  图12.1 不健康细胞
  图12.2 生长曲线和维持
  图12.3 单层细胞传代
  图12.4 连续传代
  图12.5 搅拌培养
  图12.6 悬浮培养的HL-60细胞
  图12.7 平行培养物和抗生素
  图13.1 克隆细胞产量
  图13.2 稀释法克隆培养
  图13.3 微孔板克隆培养
  图13.4 糖皮质激素对克隆的影响皮质醇类似物能提高多种细胞的克隆形成率
  图13.5 饲养层
  图13.6 琼脂中的悬浮克隆培养
  图13.7 美希索中的悬浮克隆培养
  图13.8 克隆培养环
  图13.9 单层贴壁细胞克隆的分离培养
  图13.10 悬浮细胞克隆的分离培养
  图13.11 黑色素瘤、成纤维细胞和胶质瘤细胞的悬浮生长
  图13.12 混杂培养物中过度生长
  图14.1 密度梯度法分离细胞
  图14.2 密度梯度形成器
  图14.3 离心产生的梯度
  图14.4 离心淘洗转头(Bechman Coulter)
  图14.5 磁力分选法
  图14.6 磁性细胞分选法(MACS)阳性分选
  图14.7 荧光活化的细胞分选法(FACS)
  图14.8 流式细胞仪
  图15.1 隆凸
  图15.2 培养细胞形态举例
  图15.3 为细胞学观察而设计的培养装置
  图15.4 细胞甩片离心机
  图15.5 滤膜细胞学
  图15.6 染色体制备
  图15.7 染色体染色
  图15.8 核型制备
  图15.9 DNA指纹
  图15.10 DNA测序仪
  图15.11 DNA绘谱
  图15.12 同工酶电泳
  图15.13 Agilent免疫分析机
  图16.1 分化调节
  图16.2 穷分泌因子间相互作用
  图17.1 克隆的差异
  图17.2 染色体畸变
  图17.3 转化灶
  图17.4 hTER-永生化细胞群体倍增的累计次数
  图17.5 细胞增殖的密度限制
  图17.6 鸡心脏实验
  图17.7 滤膜孔侵袭实验
  图17.8 体外血管发生检测
  图17.9 纤溶酶原活化因子
  图18.1 污染的种类
  图18.2 通过PCR检测支原体
  图19.1 冻存曲线
  图19.2 含缓慢降温隔热材料的冻存条上的安瓿
  图19.3 颈状塞降温器
  图19.4 Nunc降温器
  图19.5 程控低温冰箱
  图19.6 液氮冷藏箱
  图19.7 液氮冷藏箱设计
  图19.8 细胞冻存
  图19.9 细胞解冻
  图19.10 玻璃化保存
  图19.11 细胞入库
  图19.12 细胞的连续更换
  图19.13 细胞的运输容器
  图20.1 使用血细胞计数板
  图20.2 CASY电子细胞计数器
  图20.3 CASY电子细胞计数器的操作
  图20.4 CASY电子细胞计数器的模拟打印输出
  图20.5 Beckman计数器Vi-CELL
  图20.6 Accuri C6流式细胞仪
  图20.7 Guava流式细胞仪的输出信息
  图20.8 生长曲线
  图20.9 多孔板的布局
  图20.10 生长曲线的解释
  图20.11 Incucyte
  图20.12 Incucyte生长曲线
  图20.13 饱和密度
  图20.14 稀释细胞用于克隆
  图20.15 种板效率的线性关系
  图20.16 自动集落计数器
  图20.17 标记指数
  图20.18 扫描玻片或培养皿
  图20.19 生长分数
  图21.1 单层细胞克隆形成实验
  图21.2 存活曲线
  图21.3 存活曲线的解释
  图21.4 培养条件对细胞存活的影响
  图21.5 微滴定实验
  图21.6 百分率抑制曲线
  图21.7 持续时间的实验
  图21.8 IC50下降的时间进程
  图21.9 微滴定与克隆性存活之间的相关性
  图21.10 器官型实验
  图22.1 从乳腺分离器官样结构
  图22.2 HepaRG细胞
  图22.3 血管内皮细胞
  图22.4 嗅球切除
  图22.5 培养的黑素细胞
  图23.1 小鼠胚胎干细胞
  图23.2 人胚胎干细胞
  图23.3 拉伸的玻璃吸管
  图23.4 骨髓来源间充质干细胞
  图23.5 iPS细胞集落
  图24.1 汇合的饲养层
  图24.2 选择性饲养层
  图24.3 乳腺癌的消化分离
  图24.4 胃癌细胞系
  图24.5 胰腺癌细胞系
  图24.6 人神经胶质瘤细胞培养
  图25.1 细胞密度对于C6细胞的GFAP表达的作用
  图25.2 组织型培养和器官型培养
  图25.3 器官培养
  图25.4 球体内的分裂细胞
  图25.5 转动室系统
  图25.6 Synthecon旋转细胞培养系统
  图25.7 滤膜培养皿
  图25.8 Transwells
  图25.9 支架相基质
  图25.10 软骨构建物的MRI
  图26.1 大搅拌瓶
  图26.2 大搅拌器培养
  图26.3 生物恒定器
  图26.4 可控生物反应器
  图26.5 大规模生物反应器
  图26.6 摇动生物反应器
  图26.7 BelloCell充气器培养
  图26.8 中空纤维灌流培养
  图26.9 Coming Hyperflask
  图26.10 多表面扩增器
  图26.11 充满的Nunc细胞工厂
  图26.12 Coming CellCube
  图26.13 放在支架上的旋转培养瓶
  图26.14 旋转瓶培养
  图26.15 旋转鼓装置
  图26.16 Cytopore微载体
  图26.17 固定床反应器
  图26.18 Celligena310生物反应器
  图26.19 生物反应器的程序控制
  图26.20 NMR分析
  图26.21 机器人细胞培养
  图27.1 显微放射自显影术
  图27.2 显微放射自显影照片
  图27.3 体细胞杂交
  图27.4 杂交瘤的制备
  图28.1 12孔板
  图28.2 细胞冷冻室实验的选择
  图29.1 污染来源
  方案目录
  方案5.1 垂直式层流洁净台内的无菌技术
  方案5.2 在敞开的工作台上进行操作
  方案5.3 培养皿和培养板的操作
  方案7.1 细胞外基质(ECM)的制备
  方案8.1 pH标准色阶的制备
  方案10.1 玻璃器皿的准备和灭菌
  方案10.2 玻璃移液管的准备和灭菌
  方案10.3 螺口盖的准备和灭菌
  方案10.4 过滤装置的灭菌
  方案10.5 超纯水(UPW)的制备和灭菌
  方案10.6 D-PB SA的配制和灭菌
  方案10.7 用1X储存液配制培养基
  方案10.8 用10X浓缩液配制培养基
  方案10.9 以干粉配制培养基
  方案10.10 特制培养基的配制
  方案10.11 用注射器式过滤器除菌过滤
  方案10.12 用真空过滤瓶除菌过滤
  方案10.13 用小型连线式过滤器除菌过滤
  方案10.14 用大型连线式过滤器除菌过滤
  方案10.15 血清的收集与灭菌
  方案10.16 血清的透析
  方案11.1 分小鼠胚胎
  方案11.2 分离鸡胚
  方案11.3 人体活检组织
  方案11.4 原代外植
  方案11.5 温胰蛋白酶解离组织
  方案11.6 冷胰蛋白酶解离组织
  方案11.7 鸡胚器官原基
  方案11.8 胶原酶解离组织
  方案11.9 利用筛网的机械分离法
  方案11.10 富集活细胞
  方案12.1 培养瓶中单层培养细胞更换培养液
  万案12.2 培养板或培养皿中单层培养细胞更换培养液
  方案12.3 单层细胞传代
  方案12.4 悬浮细胞传代
  方案13.1 稀释法克隆培养
  方案13.2 条件培养基的制备
  方案13.3 饲养层的准备
  方案13.4 琼脂中克隆培养
  方案13.5 美希索中克隆培养
  方案13.6 用克隆培养环分离细胞克隆
  方案13.7 辐射法分离细胞集落
  方案13.8 悬浮细胞克隆的分离
  方案13.9 氨甲蝶呤抗性和DHFR扩增
  方案14.1 密度梯度细胞分离法
  方案14.2 磁性活化细胞分选法( MACS)
  方案15.1 倒置显微镜的使用
  方案15.2 Giemsa染色
  方案15.3 结晶紫染色
  方案15.4 利用细胞甩片离心机制备用于细胞学研究的悬浮细胞
  方案15.5 过滤细胞学
  方案15.6 显微数码照相
  方案15.7 染色体制备
  方案15.8 细胞系的DNA STR谱
  方案15.9 同工酶分析
  方案15.10 间接免疫荧光
  方案17.1 成纤维细胞永生化
  方案17.2 用端粒酶诱导人干细胞和原代培养细胞永生化
  方案17.3 细胞增殖的密度限制
  方案17.4 体外血管发生检测
  方案18.1 清洁恒温箱
  方案18.2 支原体的荧光检测
  方案18.3 通过PCR检测支原体
  方案18.4 微生物污染的去除
  方案18.5 支原体污染的去除
  方案19.1 细胞冻存
  方案19.2 冻存细胞的解冻
  方案19.3 玻璃化法保存hES细胞
  方案19.4 玻璃化保存hES细胞的解冻
  方案20.1 利用dA细胞计数器进行细胞计数
  方案20.2 基于阻抗的电子计数器
  方案20.3 用Hoechst 33258进行DNA分析
  方案20.4 Bradford方法分析蛋白
  方案20.5 用[3H]胸腺嘧啶脱氧核苷掺入的方法来测定DNA合成
  方案20.6 蛋白质合成
  方案20.7 培养瓶中单层细胞的生长曲线
  方案20.8 在多孔板中单层细胞生长曲线
  方案20.9 悬浮细胞的生长曲线
  方案20.10 测定贴壁效率
  方案20.11 用[3H]胸腺嘧啶核苷测定标记指数
  方案20.12 测定生长分数
  方案21.1 染料排斥法测定细胞生存力
  方案21 2 染料摄取法测定细胞生存力
  方案21.3 贴壁细胞的克隆形成实验
  方案21.4 基于MTT的细胞毒性实验
  方案21.5 姐妹染色单体交换
  方案22.1 表皮角质形成细胞
  方案22.2 角膜上皮细胞
  方案22.3 从乳房复位成形术标本分离乳腺上皮细胞
  方案22.4 子宫颈上皮
  方案22.5 结肠隐窝的分离和培养
  方案22.6 A鼠肝细胞的分离
  方案22.6 B HepaRG人肝细胞的纯化
  方案22.7 胰腺上皮
  方案22.8 肾上皮
  方案22.9 气管和支气管上皮
  方案22.10 口腔角质形成细胞
  方案22.11 前列腺上皮
  方案22.12 脂肪细胞的原代培养
  方案22.13 平滑肌细胞的分离和培养
  方案22.14 从成年骨骼肌分离和培养成肌细胞
  方案22.15 从骨骼肌分离和培养单肌纤维
  方案22.16 用藻酸盐微珠培养软骨细胞
  方案22.17 成骨细胞
  方案22.18 血管内皮细胞的分离和培养
  方案22.19 小肺颗粒细胞的培养
  方案22.20 人星形胶质细胞的原代培养
  方案22.21 嗅球成鞘细胞
  方案22.22 黑素细胞的培养方法
  方案23.1 小鼠胚胎干细胞的分离和原代培养
  方案23.2 小鼠胚胎干细胞的扩增
  方案23.3 人胚胎干细胞的制备
  方案23.4 hES细胞的手工传代
  方案23.5 斑马鱼胚胎的细胞培养
  方案23.6 羊水细胞的培养
  方案23.7 从人骨髓培养MSC
  方案23.8 重编程人真皮成纤维细胞产生多能干细胞
  方案23.9 小鼠骨髓来源造血细胞长期培养
  方案23.10 人长期培养起始细胞(LTC-IC)分析
  方案23.11 造血集落形成分析
  方案24.1 冻存组织
  方案24.2 在汇合的饲养层上培养
  方案24.3 乳腺肿瘤细胞的培养
  方案24.4 结肠直肠肿瘤细胞的培养
  方案24.5 从白血病/淋巴瘤建立连续细胞系
  方案25.1 器官培养
  方案25.2 球体培养
  方案25.3 滤膜培养皿
  方案25.4 神经聚集物
  方案26.1 4L分批式搅拌悬浮培养
  方案26.2 Nunc细胞工厂
  方案26.3 旋转瓶培养
  方案26.4 微载体
  方案27.1 淋巴细胞的制备
  方案27.2 用PHA刺激淋巴细胞
  方案27.3 显微放射自显影术
  方案27.4 间隔性摄像
  方案27.5 昆虫细胞的扩增
  方案27.6 细胞杂交
  方案27.7 单克隆抗体的制备